DETEKSI Trypanosoma evansi PADA KERBAU DI JAWA TENGAH MENGGUNAKAN METODE KONVENSIONAL DAN LOOP MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION (LAMP)

ARI PUSPITA DEWI, Dr. drh. R. Wisnu Nurcahyo; Dr. drh Soedarmanto Indarjulianto

2018 | Tesis | S2 Sain Veteriner

Infeksi Trypanosoma evansi pada kerbau terjadi secara sub klinis dan kronis karena derajat parasitemia yang rendah dan berfluktuasi. Deteksi Trypanosoma evansi menggunakan metode konvensional (Haematocrit Centrifugation Technique dan preparat ulas darah tipis dengan pewarnaan Giemsa) memiliki sensitifitas terbatas, sehingga perlu dikembangkan metode diagnosis yang lebih sensitif, cepat dan hemat biaya untuk mengidentifikasi dan mendiagnosanya. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi Trypanosoma evansi dengan menggunakan metode uji Loop Mediated Ishothermal Amplification (LAMP) yang mentargetkan gen Variant Surface Glicoprotein (VSG). Sebanyak 32 sampel darah kerbau berasal dari Kabupaten Brebes dan Pemalang, yang terlebih dahulu diuji terhadap adanya Trypanosoma sp dengan metode Haematocrit Centrifugation Technique (HCT) dan preparat ulas darah tipis dengan pewarnaan Giemsa, selanjutnya di uji dengan metode LAMP. Amplifikasi uji PCR dengan primer ITS-1 digunakan sebagai pembanding dari hasil LAMP. Hasil amplifikasi kemudian dielektroforesis menggunakan gel agarose 1,5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dari total 32 sampel tersebut, didapatkan adanya Trypanosoma sp sebesar 19/32 (59,3%) dengan HCT, 12/32 (37,5%) dengan preparat ulas darah tipis, 18/32 (56,2%) dengan LAMP dan 12/32 (37,5%) dengan PCR. Metode LAMP mempunyai sensitifitas yang tinggi apabila dibandingkan dengan metode PCR. Teknik LAMP dapat diaplikasikan dilapangan untuk deteksi Trypanosoma evansi pada kerbau dengan waktu yang cepat dan hemat biaya.

Trypanosoma infection in buffalo occurs subclinically and chronically due to low and fluctuating parasitemia. The conventional diagnostic procedure of Trypanosoma evansi (Haematocrit Centrifugation Technique and blood smear) shows the low sensitivity results. In addition, the alternative procedure to detect Trypanosoma evansi was needed in this decade. The aim of this study is to test the LAMP as a new method in detection Trypanosoma evansi. In this study, the target for identification is gene VSG. Thirty-two buffalo blood samples from the district of Brebes and Pemalang were used in this study. The samples were tested using conventional methods (HCT and blood smear), the LAMP with target gene VSG and PCR with target ITS-1. Then, the samples were amplified using agarose gel 1,5 %. This results showed the various positive result of each methods such HCT 19/32 (59, 3 %); blood smear 12/32 (37,5 %); LAMP 18/32 (56,2 %); and PCR 12/32 (37,5 %). This study showed that LAMP has a high sensitivity to detect Trypanosoma evansi compared with PCR. It proved that LAMP could be applied to detect Trypanosoma evansi in the buffalo.

Kata Kunci : Kerbau, Loop Mediated Isothermal Amplification (LAMP), Metode Konvensional, Trypanosoma evansi