ENKAPSULASI ANTIBODI ANTI OKRATOKSIN A DAN ANTI AFLATOKSIN B1 DALAM SILIKA GEL UNTUK CLEAN UP PADA ANALISIS OKRATOKSIN A DAN AFLATOKSIN B1 DALAM PALM KERNEL CAKE DENGAN HPLC-FLD

DENI PRANOWO,S.SI., MSI., Prof. Dr. rer. nat. Nuryono, M.S.; Prof. Drs. Jumina, Ph.D.; Prof. Dr. Ir. Ali Agus, DAA., DEA.

2016 | Disertasi | S3 Kimia

Enkapsulasi antibodi anti okratoksin A (Ab-OTA) dan anti aflatoksin B1 (Ab-AFB1) pada silika gel untuk clean up pada analisis OTA dan AFB1 dalam Palm Kernel Cake (PKC) dengan HPLC-FLD telah dilakukan. Antibodi dijebak di dalam kerangka silika gel dengan bahan dasar dari TMOS (SiTMOS), Na2SiO3 komersial (SiKom) dan Na2SiO3 hasil ekstraksi abu sekam padi (SiASP) dengan teknik sol gel. Silika gel termodifikasi antibodi digunakan sebagai matriks pada Immunoaffinity Chromatography Column (IAC). IAC kemudian diaplikasikan untuk clean up pada analisis OTA dan AFB1 dalam PKC. Matriks kolom untuk clean up OTA (IAC-SG OTA) dibuat dengan mengenkapsulasi 1 mg Ab-OTA dalam 0,5 g silika gel dari TMOS. Matriks kolom untuk clean up AFB1 (IAC-SG AFB1 SiTMOS, IAC-SG AFB1 SiKom, dan IAC-SG AFB1 SiASP) dibuat dengan mengenkapsulasi 13,6 mg Ab-AFB1 masing-masing dalam 0,5 g silika gel dari SiTMOS, SiKom, dan SiASP. Setelah matriks digerus dan dikemas ke dalam kolom selanjutnya dilakukan uji recovery dan penggunaan ulang, sebelum diaplikasikan. IAC-SG OTA memiliki recovery 95,71 ���± 6,18% dan dapat digunakan berulang sampai delapan kali pada recovery di atas 80%. Hasil clean up OTA dalam PKC dengan IAC-SG OTA diketahui 12 dari 20 sampel terkontaminasi dengan kadar tertinggi 1,47 ���µg/kg dan rerata 0,19 ���µg/kg, sedangkan dengan IAC komersial ditemukan 13 sampel terkontaminasi dengan kadar tertinggi 1,56 ���µg/kg dengan rerata 0,21 ���µg/kg. Kedua hasil analisis berkorelasi linier dan tidak berbeda signifikan. Recovery kolom IAC-SG AFB1 SiTMOS, IAC-SG AFB1 SiKom, dan IAC-SG AFB1 SiASP terhadap AFB1 masing-masing adalah 92,12 ���± 7,86; 93,75 ���± 6,57; dan 91,78 ���± 9,50%. Kapasitas ikat kolom IAC-SG AFB1 SiTMOS sebesar 40 ng sedangkan IAC-SG AFB1 SiKom dan IAC-SG AFB1 SiASP sebesar 50 ng. Ketiga kolom dapat digunakan ulang sampai lima kali dengan recovery di atas 80%. Hasil analisis dengan empat kolom IAC yang berbeda diketahui 9 dari 10 sampel PKC terkontaminasi AFB1. Hasil clean up menggunakan IAC-SG AFB1 SiTMOS ditemukan kadar tertinggi AFB1 6,83 ���µg/kg dan rerata 1,14 ���µg/kg, menggunakan IAC-SG AFB1 SiKom kadar tertinggi 7,59 ���µg/kg dan rerata 1,56 ���µg/kg, dan menggunakan IAC-SG AFB1 SiASP kadar tertinggi 8,03 ���µg/kg dan rerata 1,73 ���µg/kg, sedangkan hasil clean up dengan AIC komersial diperoleh kadar tertinggi 9,49 ���µg/kg dan rerata 1,62 ���µg/kg. Recovery rata-rata hasil clean up menggunakan ketiga kolom IAC-SG lebih rendah dibanding menggunakan IAC komersial namun semuanya memiliki korelasi linier.

Encapsulation of anti-OTA and anti-AFB1 antibodies on silica gel has been done in order to perform clean up OTA and AFB1 analysis in Palm Kernel Cake (PKC) with HPLC-FLD. For this purpose, the antibodies were trapped in pore of silica gel, made of the TMOS (SiTMOS), commercial Na2SiO3 (SiKom) and Na2SiO3 extracted from rice husk ash (SiASP) as raw materials using sol gel technique. The modified silica gel with antibodies were then used as Immunoaffinity Chromatography Column (IAC) matrix and applied for OTA and AFB1 clean up performed in PKC. Matrix of IAC-SG OTA column was prepared by encapsulating of 1 mg Ab-OTA in 0.5 g silica gel of TMOS. While, for matrices of IAC-SG AFB1 SiTMOS, IAC-SG AFB1 SiKom, and IAC-SG AFB1 SiASP columns were prepared by encapsulating of 13.6 mg Ab-AFB1 in 0.5 g silica gel from SiTMOS, SiKom, and SiASP, respectively. In addition, the matrices were packed into the columns, followed by recovering and re-using tests prior being applied to the real samples. The recovery result of IAC-SG OTA was 95.71 ���± 6.18%, the column could be used for eight times repetition with the recovery result reached more than 80%. Furthermore, the OTA in PKC using IAC-SG OTA clean up found 12 of 20 contaminated samples with the highest level of 1.47 ���µg/kg and the average of 0.19 ���µg/kg, while for using comercial IAC, found 13 of 20 contaminated samples with the highest level of 1.56 ���µg/kg and the average of 0.21 ���µg/kg. Both analytical results were linear correlated and not significantly different. The recovery results of IAC-SG AFB1 SiTMOS, IAC-SG AFB1 SiKom, and IAC-SG AFB1 SiASP columns of AFB1 were 92.12 ���± 7.86, 93.75 ���± 6.57, and 91.78 ���± 9.50%, respectively. The binding capacity of the IAC-SG AFB1 SiTMOS columns was 40 ng, and for IAC-SG AFB1 SiKom and IAC-SG AFB1 SiASP columns were 50 ng. All the columns could be re-used up to five times repetitions with recovery more than 80%. In addition, based on PKC analysis, 9 of 10 AFB1 contaminated samples were found. The highest level of AFB1 found after clean up using IAC-SG AFB1 SiTMOS was 6.83 ���µg/kg with average of 1.14 ���µg/kg, while for IAC-SG AFB1 SiKom and IAC-SG AFB1 SiASP samples were 7.59 ���µg/kg with average of 1.56 ���µg/kg, and 8.03 ���µg/kg with average of 1.73 ���µg/kg, respectively. Whereas for the commercial IAC, the highest level of clean up was reached 9.49 ���µg/kg and the average was 1.62 ���µg/kg. The clean up recovery result using IAC comercial is higher in comparison with the other colums, however they were linear correlated.

Kata Kunci : enkapsulasi, IAC, okratoksin, aflatoksin, palm kernel cake, sol gel