INDUKSI TUNAS DAN EKSPRESI GEN Dendrobium Orchid Homeobox 1 DENGAN PENAMBAHAN PEPTON PADA MEDIUM KULTUR IN VITRO ANGGREK Dendrobium lineale Rolfe

WAHYU DEWI ASTUTI N, Dr. Endang Semiarti, M.S., M.Sc.

2016 | Skripsi | BIOLOGI

Dendrobium lineale Rolfe adalah anggrek alam endemik Papua yang memiliki percabangan bunga yang banyak dan aroma bunga yang harum. Populasi anggrek ini telah terancam punah sehingga perlu upaya konservasi. Teknik kultur in vitro dapat diterapkan untuk konservasi anggrek ini. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui fase perkembangan embrio dan pengaruh pepton terhadap kecepatan pertumbuhan embrio sampai terbentuk tunas dan ekspresi gen pembentukan tunas, Dendrobium Orchid Homeobox 1 (DOH1), pada protokorm anggrek D.lineale. Penelitian ini dilakukan dalam 2 tahap: 1). Perkecambahan biji D.lineale pada medium NP0, NP+Pepton 2gr/L, VW0 dan VW+Pepton 2gr/L; dan 2). Analisis ekspresi gen DOH1 pada protokorm anggrek D.lineale. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fase perkembangan embrio sampai terbentuk tunas pada anggrek D.lineale dapat dibedakan ke dalam 6 fase. Penambahan pepton 2 gr/L pada medium menginduksi perkecambahan pada semua biji, memperbesar ukuran protokorm, serta menyebabkan warna protokorm cepat berubah menjadi hijau. Analisis cDNA dengan RT-PCR menggunakan primer DOH1FI dan DOH1R5 menunjukkan bahwa gen DOH1 telah terekspresi dengan teramplifikasinya cDNA sepanjang 1,2kb dari pustaka cDNA protokorm umur 3MSP pada medium yang ditambahkan pepton dan pada protokorm umur 5MSP pada semua medium perlakuan. Medium paling efektif untuk perkecambahan biji dan induksi tunas in vitro D.lineale adalah VW+Pepton 2gr/L.

Dendrobium lineale Rolfe is an endemic orchid of Papua which has numerous branches with fragrant flowers. The population of this orchid is tend to be rare, therefore needs a conservation effort. In vitro culture technique can be used for conservation of this orchid. The objectives of this research were to determine the embryo development phases of D.lineale, to analyze the effect of peptone which is added in the in vitro culture medium for shoot induction and the roles of shoot inducing gene, Dendrobium Orchid Homeobox 1 (DOH1), on the development of D.lineale protocorms. This research was conducted in two steps: 1). Seed germination of D.lineale in VW0, NP0, VW+2 g/L of Peptone and NP+2g/L of Peptone mediums; and 2). Expression analysis of DOH1 gene on the development of D.lineale protocorms. The results showed that the phases of D.lineale embryo development were generated into six phases. The addition of 2 gr/L of peptone in the culture medium induced germination of all seeds, enlarged the protocorm size and rapidly changed the colour of protocorm from yellow into green. The cDNA of DOH1 was detected by RT-PCR analysis with a size of 1.2 kb at 3WASP protocorms which is maintenanced in medium supplemented with peptone and detected at 5WASP protocorms in all treatment of medium. The most effective medium for in vitro seed germination and shoot induction is VW + 2 gr/L of Peptone

Kata Kunci : culture medium, Dendrobium lineale, DOH1, peptone, seed germination, shoot induction