IDENTIFIKASI MOLEKULER ISOLAT BAKTERI KITINOLITIK DARI TERASI DAN GEN PENYANDI KITINASENYA

BOBBY DWI KUSUMA N, Prof. Dr. Ir. Ustadi, M.P. ; Dr. Ir. Murwantoko, M.Si.

2016 | Skripsi | S1 TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

Kemelimpahan senyawa kitin memiliki urutan kedua setelah selulosa, pemanfaatan kitin menjadi lebih luas ketika sudah dipecah menjadi N-Asetil-D-glukosamin dengan memanfaatkan enzim pendegradasi kitin yaitu enzim kitinase. Enzim kitinase diperoleh dari isolat bakteri pangan fermentasi yaitu terasi yang telah diisolasi sebelumnya. Identifikasi bakteri yang telah diisolasi perlu dilakukan secara molekuler untuk mengetahui spesies bakteri tersebut menggunakan gen 16S rDNA yang merupakan gen konservatif pada setiap organisme prokariotik. Hasil Identifikasi yang dilakukan menemukan 3 spesies bakteri yaitu Bacillus cereus, Enterobacter cloacae dan Achromobacter xyloxoidans. Hubungan kemiripanan antara isolat bakteri kitinolitik terasi dengan bakteri referensi yaitu SMG 1.1, TB 33 sebesar 100% dengan B. cereus, JKT 3.3 sebesar 68% dengan B. cereus, SMG 1.6 sebesar 100% dengan Achromobacter xylosoidan, dan TB 22 sebesar 100 % dengan Enterobacter cloacae strain 34997. Gen kitinase yang ada pada isolat juga diisolasi untuk kebutuhan penelitian selanjutnya dan diperoleh asam amino yang berperan sebagai active site pada spesies Bacillus cereus adalah Tyrosine (Y), Phenylalanine (F), Aspartate (D), Glutamate (E), Glutamine (Q), dan Tryphtophan (W), sedangkan asam amino yang berperan pada spesies Enterobacter cloacae adalah Glutamate (E), Tyrosine (Y), Glutamine (Q), asparagine (N), dan Alanine (A).

Abundance of chitin compounds have a second order after cellulose, chitin can widely be used when has been degradation into N-acetyl-D-glucosamine utilizing chitin degrading enzyme, the chitinase enzyme. Chitinase enzyme was obtained bacterial isolates from fermented food “terasi” that had been isolated previously. Identification of bacteria that have been isolated needs to be determine with molecular methods using 16S rDNA gene which is the conservative gene in any prokaryotic organism. Identification results showed three species of bacteria, namely Bacillus cereus, Enterobacter cloacae and Achromobacter xyloxoidans. The homology relationship between chitinolytic bacterial isolates with reference bacteria showed that SMG 1.1, TB 33 had 100% homology with B. cereus, JKT 3.3 68% with B.cereus, SMG 1.6 100% with Achromobacter xylosoidan, and TB 2.2 100% with Enterobacter cloacae strain 34997. Chitinase genes that exist in isolate also needs to be isolated for further study. Amino acids that act as active sites on Bacillus cereus were tyrosine (Y), Phenylalanine (F), Aspartate (D), Glutamate (E), Glutamine (Q), and Tryphtophan (W), while the amino acids that play role as active sites in Enterobacter cloacae were Glutamate (E), Tyrosine (Y), Glutamine (Q), asparagine (N), and Alanine (A).

Kata Kunci : Terasi, Gen 16S rDNA, kitin, kitinase. / Terasi, 16S rDNA gene, chitin, chitinase