UPAYA ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA BIOAKTIF EKSTRAK BATANG COMBRANG (Nicolaia speciosa Horan) SEBAGAI ANTI-INFLAMASI DAN UJI AKTIVITASNYA MELALUI HAMBATAN COX

SRI SUTJI SUSILOWATI, Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt., Prof. Dr. Sugeng Riyanto, M.S., Apt., Prof. Dr. Agung Endro Nugroho, M.Si., Apt.

2015 | Disertasi | S3 Ilmu Farmasi

Tujuan umum penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi tanaman combrang (N.speciosa Horan) sebagai tanaman penghasil senyawa yang mempunyai aktivitas anti-inflamasi. Tujuan khususnya antara lain adalah untuk mengetahui aktivitas analgetika-anti-inflamasi ekstrak n-heksan, kloroform, etil asetat dan metanol batang combrang, mengetahui aktivitas anti-inflamasi tiap fraksi ekstrak etil asetat melalui uji hambatan COX -1 dan COX-2 secara in vitro, mengetahui struktur senyawa aktif dengan melakukan elusidasi struktur menggunakan spektrometer UV, IR, NMR dan analisis dengan GC-MS dan LC MS. Penelitian ini bersifat non-eksperimental dan eksperimental, ekstraksi dilakukan secara maserasi dengan pelarut yang meningkat kepolarannya, yaitu dari n-heksan, kloroforrm, etil asetat dan terakhir metanol. Uji aktivitas analgetik secara in vivo dengan menggunakan mencit (Mus muscullus) jantan dengan metode geliat asetat, dan uji aktivitas anti-inflamasi secara in vivo dengan menggunakan hewan uji tikus putih (Rattus norvegicus) jantan, dengan metode hambatan edema terinduksi karagenan, sebagai kontrol positif adalah Na diklofenak. Ekstrak etil asetat selanjutnya difraksinasi menggunakan kromatografi kolom vakum dan eluen yang meningkat kepolarannya, diperoleh 17 fraksi, kemudian ke 17 fraksi diuji aktivitas anti-inflamasinya secara in vitro menggunakan kit dari Caymann melalui hambatan aktivitas COX-1 dan COX-2. Hasil yang diperoleh dari uji in vivo ekstrak n-heksan, kloroform, etil asetat, metanol, dan larutan Na-diklofenak yaitu aktivitas analgetiknya (ED50 analgetik) berturut-turut: 568,7; 969,7; 56,5; dan 2318,8 mg/kg. Aktivitas anti inflamasi (% Daya anti-inflamasi dosis 1mg/kg) ekstrak n-heksan, kloroform, etil asetat, metanol, dan larutan Na-diklofenak berturut-turut adalah: 0,10; 0,07; 0,88; 0,02;1,62 %. Hasil uji hambatan COX untuk ke 17 fraksi (F1 dan F2 menghambat COX-1 dan COX-2; F3, F4, F5, F6 F10 menghambat COX-1; F14, F15, F16 dan F17 menghambat COX-2. Analisis menggunakan GC-MS F1 – F6 mengandung asam linoleat dan esternya, F3, F4 dan F5 mengandung senyawa sterol yaitu (5β, 12α)-12-hidroksi-ergost-1- en-3-on. Diduga asam linoleat dan sterol yang menghambat aktivitas COX. Fraksi F14- F17 memberikan reaksi positif terhadap FeCl3, diduga mengandung senyawa fenolik. Kesimpulannya ekstrak etil asetat batang combrang mempunyai aktivitas analgetik dan anti-inflamasi lebih tinggi dari pada ekstrak n-heksana, kloroform dan metanol. Ekstrak etil asetat mengandung senyawa golongan fenolat, flavonoid, dan saponin. Fraksi ekstrak etil asetat menghambat COX-1 dan COX-2 (F1 dan F2), hanya menghambat COX-1 (F10), dan hanya menghambat COX-2 (F3-F6 dan F14-F17). Fraksi F16 diduga mengandung senyawa fenolik. Mekanisme anti-inflamasi adalah dengan penghambatan enzim COX.

The general aim of this research was to study the potency of combrang plant (Nicolaia speciosa Horan) as a plant containing anti-inflammatory compounds. The special aims were to study analgesic anti-inflammatory activities of n-hexane extract, chloroform extract, ethyl acetate extract, and methanol extract of combrang stembark; to study analgesic anti-inflammatory activities of fractions of ethyl acetate extract via in vitro inhibition of COX-1 and COX-2 activities; to know the structure of active compound by structure elucidation using UV, IR and NMR spectroscopy, LC-MS and GC-MS analysis. This research was non-experimental and experimental design, the sample was ectracted by maceration method, using degradated solvent from non polar to polar (n-hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol). In vivo analgesic activity test used male albino mice (Mus muscullus) by acetic acid writhing reflex test, and in vivo anti-inflammatory activity test used male albino rat (Rattus norvegicus) by carragenan-induced oedema test, Na-diclofenac as a postive control. Ethyl acetate extract was fractionated by vacum collumn chromatography using degradated elluent (n-hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol), found 17 fractions, then anti-inflammatory activity of the 17 fractions to be tested using Caymann kit via COX-1 and COX-2 inhbition activity test. In vivo analgesic activity test of n-hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol extracts found that their analgesic activity (ED50 ) were 576,2; 954,6; 57,7; and 1573,5 mg/kg respectively. Anti-inflammatory activity test of n-hexane, chloroform, ethyl acetate, methanol extract and Na-diclofenac solutioan found that their anti -inflammatory activity were 0,10; 0,07; 0,88; 0,02; 1,62 % respectively. Inhibition of COX activity test of 17 fractions found that F1 and F2 inhibit both COX-1 and COX-2, F3-F6 inhibit only COX-2, F10 inhibit only COX-1, F14-F17 inhibit only COX-2. GC-MS analysis found that F1-F6 contain linoleic acid and its ester, F3-F5 sterol compounds (5β, 12α)-12-hidroksi-ergost-1-en-3-on, its give the conclussion that the two compounds was responsible to inhibit COX activity. F14-F17 give positive reaction to FeCl3, that fractions might contain flavonoid or phenolic compounds. The conclusion of this study that the ethyl acetate extract of combrang stembark had highest analgesic and anti-inflammatory activities than the nhexane, chloroform and methanol extracts. Ethyl acetate extract contained fenolic, flavonoid and saponin compounds group. Some of the ethyl acetate extract fractions inhibit both the COX-1 and COX-2 (F1 dan F2), inhibit only the COX-1 (F10), and inhibit only the COX-2 (F3-F6, and F14-F17). F16 fraction contain fenolic. The mechanism of anti-inflammatory activities was inhibition of COX activity.

Kata Kunci : Isolation, identification, bioactive compounds, anti-inflamation, COX inhibitor