Isolasi dan Identifikasi Struktur Senyawa Sitotoksik dari Ekstrak Etil Asetat Kultur Fungi Endofit Trichoderma sp. dari Jinten (Coleus amboinicus Lour.)

DWI KOKO PRATOKO, Dr. Puji Astuti, M.Sc., Apt.;Prof. Dr. Subagus Wahyuono, M. Sc., Apt.

2015 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Pada penelitian sebelumnya diketahui bahwa ekstrak etil asetat hasil fermentasi fungi endofit Trichoderma sp. dari batang jinten (Coleus amboinicus Leur.) memiliki aktivitas sitotoksik secara in vitro terhadap sel T74D yang memiliki potensi dikembangkan sebagai agen antikanker. Penelitian ini bertujuan guna mengisolasi dan mengidentifikasi struktur senyawa aktif pada ekstrak etil asetat kultur media fungi endofit Trichoderma sp. dari batang jinten yang bersifat sitotoksik terhadap sel kanker payudara T47D. Produksi metabolit sekunder dilakukan melalui fermentasi menggunakan media PDB selama 14 hari. Penyarian filtrat hasil fermentasi dilakukan dengan menggunakan metode ekstraksi cair-cair menggunakan pelarut etil asetat. Metode pemisahan dan pemurnian menggunakan metode kromatografi kolom dan klt preparatif. Untuk uji kemurniannya menggunakan metode KLT dan KCKT.Uji sitotoksik terhadap sel T47D dan sel vero dilakukan dengan metode MTT, dimana IC50 dan Selectivity index (SI) digunakan sebagai parameter efektivitas antikanker. Isolat yang didapat dilakukan identifikasi struktur menggunakan spektrometer IR, 13C-NMR dan 1H-NMR serta spektrofotometer UV-Vis. Berdasarkan penelitian yang dilakukan isolat 2.2 merupakan senyawa mayor dalam ekstrak dan memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel T47D dan sel vero berturut – turut dengan IC5034,94 μg/mL dan 118,13μg/mL dengan nilai SI sebesar 3,38. Berdasarkan spektrum IR, 13C-NMR, 1H-NMR dan DEPT didapatkan bahwa isolat 2.2 diperkirakan memiliki struktur dengan keberadaan gugus amida dan C ikatan rangkap dua (alkena).

Based on previous studies, ethyl acetate extracts of Trichoderma sp. endophytic fungi fermented of cumin stem (Coleus amboinicus Leur.)have cytotoxic activity to T47D cells in vitro and can be developed as a source of cytotoxic compound. This study aimed to isolate and identify the cytotoxic compound in ethyl acetate extracts of endophytic fungi culture Trichoderma sp. Secondary metabolite production was carried out through fermentation using the PDB as medium for 14 days and the medium was extracted with ethyl acetate. Separate and purify methode was done using column cromatography and TLC preparative. TLC and HPLC method was done to test the purity of isolate. In cytotoxic assay, T47D and Verocells were cultured in the presence of pure isolate and was evaluated by MTTassay, whereas IC50 and Selectivity Index were used as the parameters to evaluateeffectivity of anticancer.Active isolat was characterized by IR, 1H-NMR,13C-NMR, and DEPT. Isolate 2.2 is a major compound in extract and have cytotoxic activity against T47D and vero cell line with their IC50 values of 34,94 and 118,13 μg/mL, respectively and selectivity index is 3,38. Based on infrared, 1H-NMR,13C-NMR and DEPT spectrum, confirmed that the structure of isolate 2.2 have an amide and C double bond (alkenes group).

Kata Kunci : Coleus amboinicus Lour., Trichoderma sp., isolasi, identifikasi struktur, senyawa sitotoksik.