ANALISIS DNA BABI PADA PERMEN LUNAK MENGGUNAKAN PRIMER MITOKONDRIA D-LOOP DENGAN METODE REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION

THERESIA SEPMIARTI, Prof. Dr. Sudjadi, M.S., Apt; Prof. Dr. Abdul Rohman, M.Si., Apt

2015 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Gelatin merupakan salah satu bahan yang luas penggunaannya yaitu dalam sediaan farmasi, makanan, maupun kosmetik. Namun demikian yang menjadi permasalahan bagi kaum muslim adalah adanya penggunaan gelatin berbahan babi. Berdasarkan hal tersebut maka penelitian ini diperlukan dalam rangka pengembangan metode analisis yang mampu mendeteksi adanya DNA gelatin babi dalam produk makanan terutama pada permen. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk merancang primer dari daerah mitokondria D-loop yang secara spesifik dapat mengidentifikasi adanya DNA babi, maupun DNA gelatin babi pada permen lunak dengan metode realtime PCR serta mendapatkan batas deteksinya. Metode analisis ini diharapkan spesifik, sensitif dan reliable untuk analisis DNA babi dalam permen lunak. Analisis untuk pengujian spesifisitas primer dilakukan terhadap jaringan segar (babi, sapi, ayam, kambing dan tikus), gelatin (sapi, babi, dan ikan lele), dan terhadap permen campuran gelatin babi-sapi (konsentrasi 10, 20, 30, 40, 50, dan 100%). Sensitifitas diukur pada beberapa seri pengenceran permen gelatin babi (10000, 1000, 100, 10, 5, dan 1 pg) dan untuk uji keterulangan dilakukan terhadap permen gelatin babi 100%. Metode RT-PCR dengan primer D-Loop ini diaplikasikan untuk menganalisis sampel permen yang beredar di pasaran. Hasil identifikasi menunjukkan bahwa real time PCR dengan primer D-Loop 318 dengan panjang amplikon 146 pb secara spesifik mampu membedakan DNA babi diantara DNA spesies lainnya pada suhu penempelan optimum 61,40C. Konsentrasi terendah yang masih dapat diamplifikasi dengan baik oleh primer tersebut adalah 10 pg. Nilai koefisien variasi (CV) pada analisis keterulangan adalah 6,32%. Hasil amplifikasi lima produk permen pasaran menggunakan primer tersebut menunjukkan tidak ada produk yang mengandung babi.

Gelatin is ingredient that is widely used in pharmaceutical, food, and cosmetics. However, the problem for muslim community is the use of gelatin from porcine. This study is important in order to develop analytical methods that capable of detecting the presence of porcine DNA in food products, especially in candy. The purpose of this study was to obtain primer from mitochondrial D-loop that can identify the porcine DNA or gelatin in soft candy by realtime PCR and obtain the limit of detection. The method is expected to specific, sensitive and reliable for the analysis of porcine DNA in candy products. Analysis for the primer specificity performed on fresh tissue (pig, cows, chickens, goats and rats) and gelatin sources (beef, pork, and catfish). Amplification was also performed on soft candy from porcine-bovine mixture gelatin (10, 20, 30, 40, 50, and 100%). Sensitivity test was perfomed by measuring amplification at 6 dilution series (10000, 1000, 100, 10, 5, and 1 pg) and repeatability test on porcine gelatin candies. RT-PCR method using primer mitochondrial D-Loop was applied to analyze to candies purchased from market. The results show that the real time PCR with primer D-Loop 318 specifically able to identify the presence of porcine DNA in fresh tissue and gelatin sources at optimum annealing temperature 61,40C. The limit of detection of porcine DNA was 10 pg. The coefficient of variation (CV) on repeatability analysis was 6.32%. Five products from market were examined by using the primer showed none porcine DNA was detected.

Kata Kunci : primer mitochondrial D-loop, porcine DNA, gelatin, realtime PCR