DETEKSI METABOLIT SEKUNDER GOLONGAN ALKALOID SELAMA PERKEMBANGAN EMBRIOID AWAL KULTUR MIKROSPORA Datura metel L. DENGAN METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

NUR NABILA S, Djoko Santosa S.Si.,M.Si.

2015 | Skripsi | S1 FARMASI

Penelitian ini bertujuan untuk menginduksi mikrospora kecubung (Datura metel L.) menjadi embriogenik dengan perlakuan starvasi pada suhu 4°C dan sentrifugasi dan mengetahui profil kromatografi lapis tipis senyawa golongan alkaloid selama perkembangan awal embrioid. Penelitian ini diawali dengan mesterilisasi kuncup bunga kecubung berukuran 3-4,5 cm dan selanjutnya dibuka untuk diambil kepala sari kemudian kepala sari dihancurkan agar mirkospora terpisah dari anternya. Mikrospora pada stadium uni-nukleat akhir diberi perlakuan stress berupa kombinasi suhu 4oC dan sentrifugasi dalam media starvasi. Inkubasi di suhu dingin berlangsung selama 3 hari, dan sentrifugasi dilakukan selama 20, 30, dan 40 menit. Setelah 3 hari mikrospora dipindahkan ke media Nitsch&Nitsch dan diinkubasi dalam suasana gelap pada suhu 28oC selama 7 dan 14 hari. Analisis sitologi sel mikrospora dilakukan dengan mengamati persentase viabilitas mikrospora embriogenik dan pembelahan inti sel mikrospora. Analisis kandungan senyawa metabolit dilakukan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis dengan fase diam plat silika gel 60 F254 dan fase gerak kloroform:metanol:amonia (85:14:1) dilanjutkan analisis kuantitatif dengan densitometri. Hasil menunjukkan bahwa pemberian stres suhu dingin yang dikombinasi dengan sentrifugasi dalam media B mampu menginduksi embriogenesis mikrospora Datura metel L. Sentrifugasi selama 40 menit menghasilkan jumlah sel mikrospora embriogenik lebih banyak dibandingkan sentrifugasi selama 20 dan 30 menit. Sel sel mikrospora selama mengalami starvasi maupun perkembangan awal embrioid mikrospora kecubung mengandung senyawa alkaloid yang ditunjukkan adanya kesamaan bercak berwarna kecokelatan pada hRf 29, 32, 34, 39, dan 50 setelah disemprot Dragendorff-NaNO2. Bercak dengan hRf 75 hanya dimiliki oleh ekstrak mikrospora.

This study aims to induce microspore of Datura metel L. into embryogenic by starvation treatment at 4°C and centrifugation, and to identify thinlayer chromatography profile of Alkaloid during early embrioid development. The research is started by sterilizing D.Metel bud which size is 3-4,5 cm, then cut the bud to take the anther. Then crushed the anther to isolate microspore from the anther. Late uni-nucleate state microspore is stressed by combination of starvation, cold, and centrifugation treatment. Incubation in cold temperature lasted for 3 days, and centrifugation is done for 20,30, and 40 minutes. Then microspores were transferred to Nitsch and Nitsch medium and incubated in dark place at temperature 28°C for 7 and 14 days. Cytological analysis of microspore cell viability is done by observing the percentage of embryogenic microspores and microspore cell nuclear division. Alkaloid were detected using thin layer chromatography (stationary phase: silica gel 60 F254 plate; mobile phase: kloroform: metanol: amonia (85:14:1) The result shows that cold and starvation stress which combine with centrifugation stress could induce microspore embryogenesis of D.metel. centrifugation for 40 minutes have more microspore embryogenic than centrifugation for 20 and 30 minutes. Microspore cell during stress treatment and early embryoid development contain Alkaloid which is shown from brown spot at hRf 29,32,34,39, and 50 after sprayed with Dragendorf-NaNO2. Spot at hRf 75 only appear in microspore extract.

Kata Kunci : mikrospora, Datura metel L., starvasi, androgenesis, alkaloid