EKSPRESI Homo sapiens microRNA 21 (Hsa-miR-21) TERHADAP PHOSPHATASE AND TENSIN HOMOLOG (PTEN) PADA CELL LINE RAJI RESISTEN DOXORUBICIN SEBAGAI DASAR PENGEMBANGAN AWAL BIOMARKER DAN TARGETED THERAPY LIMFOMA

I GUSTI AGUNG AYU HARI TRIANDINI, Prof. dr. Sofia Mubarika, M.Med.Sc., Ph.D.;Dr. Med. dr. Indwiani Astuti

2015 | Tesis | S2 Bioteknologi

Resistensi doxorubicin merupakan kendala dalam terapi limfoma. Beberapa faktor yang berperan dalam kemoresistensi tersebut adalah regulasi epigenetik oleh microRNA, drug efflux oleh protein transporter dan penurunan ekspresi protein apoptosis. Penghambatan sinyal apoptosis pada sel Raji sebagai model in vitro limfoma sel B subtipe Non Hodgkin dengan agresivitas tinggi, terkait dengan ekspresi protein EBV (LMP1) melalui jalur PI3K/Akt yang dihambat oleh PTEN sebagai tumor suppressor (protein apoptosis). Mekanisme aksi PTEN diregulasi oleh mekanisme epigenetik hsa-miR-21 pada limfomagenesis. Hsa-miR-21 diduga berperan sebagai oncomir yang meregulasi resistensi doxorubicin pada limfoma sel B subtipe Non Hodgkin melalui penghambatan aktivitas PTEN. Tahapan penelitian yang dilakukan untuk mendapatkan perbandingan ekspresi hsa-miR-21 dan PTEN pada sel Raji/WT dan Raji/Dox antara lain: analisis in silico interaksi hsa-miR-21 terhadap Pten, kultur cell line Raji/WT dan Raji/Dox, MTT assay, analisis imunositokimia ekspresi P-gp (indikator resistensi) dan PTEN secara semi kuantitatif dengan software Image J, isolasi RNA, sintesis cDNA dan kuantifikasi relatif ekspresi hsa-miR-21 dengan qPCR menggunakan UniSp6 sebagai exogenous pseudo reference gene dengan metode Livak dan delta Cq. Hasil analisis in silico menunjukkan bahwa Pten dihambat (bukan didegradasi) oleh hsa-miR-21. Morfologi giant cell ditemukan pada sel Raji/Dox. Fold resistance sel Raji/Dox pada MTT assay yaitu 2,46 dengan peningkatan ekspresi P-gp dengan metode imunositokimia sebesar 1,74 kali. Fold change expression hsa-miR-21 pada sel Raji/Dox mencapai 5,06 kali dibandingkan dengan sel Raji/WT dan diiringi dengan penurunan persentase ekspresi PTEN yang mencapai 2 kali lipat secara imunositokimiawi. Hsa-miR-21 berpotensi menjadi kandidat biomarker dan target terapi pada limfoma sel B subtipe Non Hodgkin resisten doxorubicin.

Doxorubicin resistance is the problem in lymphoma therapy. Many factors influence drugs resistance, namely epigenetic regulation by microRNA, drug efflux by transporter protein and apoptotic protein loss expression. Inhibition of apoptotic signaling in Raji cell as in vitro model of high aggressivity Non Hodgkin B cell lymphoma is related to the expression of EBV protein (LMP1) through PI3K/Akt pathway that inhibited by PTEN as tumor suppressor (apoptotic protein). PTEN mechanism of action is regulated by epigenetic mechanism of hsa-miR-21 in lymphomagenesis. Hsa-miR-21 was hypothesized as oncomir that could regulate doxorubicin resistance in Non-Hodgkin B cell lymphoma through inhibition of PTEN. Several analysis were conducted to get the comparison of hsa-miR-21 and PTEN expression in Raji/WT and Raji/Dox such as: in silico interaction of hsa-miR-21 and Pten, Raji/WT and Raji/Dox cell line culture, MTT assay, immunocytochemistry of P-gp (resistance indicator) and PTEN by Image J software analysis, RNA isolation, cDNA synthesis and relative expression quantification of hsa-miR-21 with qPCR analysis using UniSp6 as stable exogenous pseudo reference gene by Livak and delta Cq method. In silico analysis shown that Pten was inhibited (not degraded) by hsa-miR-21. Giant cell morphology was found in Raji/Dox. Fold resistance of Raji/Dox in MTT assay was 2,46 and 1,74 fold expression of P-gp using immunocytochemistry method. Fold change expression of hsa-miR-21 in Raji/Dox was 5,06 greater than doxorubicin sensitive Raji cell line meanwhile 2 fold under expressed of PTEN by immunocytochemistry technique. Therefore, hsa-miR-21 is potential candidate biomarker and targeted therapy for doxorubicin resistance in Non-Hodgkin B cell lymphoma.

Kata Kunci : hsa-miR-21, PTEN, Raji, resistensi, doxorubicin.