PROFIL HEMATOLOGIS DAN DETEKSI MOLEKULAR PEMBAWA SIFAT HEMOGLOBIN E DI YOGYAKARTA

Magfirahtul Jannah, Dr.biol.hom Nastiti Wijayanti, M.Si.

2014 | Tesis | S2 Biologi

Hemoglobin E (HbE) merupakan salah satu varian kelainan struktural hemoglobin yang paling umum ditemukan di Asia Tenggara, termasuk Indonesia. HbE disebabkan oleh substitusi GA pada kodon ke-26 ekson 1 gen HBB, mengakibatkan perubahan asam glutamat menjadi lisin. Mutasi HbE menyebabkan penurunan kecepatan sintesis rantai β-globin. HbE disease dan carrier HbE bersifat asymptomatic, namun terjadi peningkatan konsentrasi HbA2 pada carrier HbE hingga lebih dari 13%. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) dengan enzim restriksi MnlI digunakan untuk mendeteksi mutasi HbE. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan deteksi molekular menggunakan teknik RFLP sebagai uji konfirmasi terhadap hasil analisis hematologis. Spesimen penelitian berupa sampel darah peserta skrining thalassemia tahun 2013 yang dilakukan oleh Yayasan Thalassemia Indonesia/Persatuan Orangtua Penyandang Thalassemia Indonesia (YTI/POPTI) cabang Yogyakarta dan Fakultas Biologi UGM. Subjek penelitian terdiri atas 8 laki-laki dan 20 perempuan berusia 1-37 tahun, yang memenuhi kriteria inklusi dan kontrol normal. DNA diisolasi dari darah tiap individu lalu diamplifikasi menggunakan primer forward 5’-AGAAGTCTGCCGTTACTGCC-3’ dan reverse 5’-AGGCCATCACTAAAGGCACC-3’ pada sekuen gen HBB. Hasil amplifikasi kemudian dianalisis dengan teknik RFLP menggunakan enzim restriksi MnlI. Interpretasi data dilakukan dengan membandingkan perbedaan ukuran dan jumlah fragmen DNA hasil digesti antara individu normal dengan terduga carrier, selanjutnya dibandingkan dengan hasil analisis hematologis. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 10 individu (35,71%) dengan abnormalitas pada pemeriksaan indeks korpuskular dan gambaran darah tepi dalam analisis hematologis terkonfirmasi sebagai carrier HbE menggunakan teknik RFLP, sedangkan HbE disease tidak ditemukan. RFLP dengan enzim restriksi MnlI dapat digunakan sebagai metode uji konfirmasi terhadap hasil analisis hematologis carrier HbE.

Hemoglobin E (HbE) is the most common structural hemoglobin variant disorders in South East Asia, including Indonesia. It is resulting from substitution of GA at codon 26 exon 1 HBB gene, leading to replacement of glutamic acid into lysine. HbE mutation leading to a decrease in the synthetic rate of β-globin chain. HbE disease and carrier are asymptomatic, but HbE carrier have an increase in the concentration of HbA2 by more than 13%. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) with the MnlI restriction enzyme used to detect HbE mutations. This study aims to perform molecular detection using RFLP technique as a confirmatory test to the results of hematological analysis. Specimens of research is blood samples of thalassemia screening participants in 2013 were carried out by the Yayasan Thalassemia Indonesia/Persatuan Orangtua Penyandang Thalassemia Indonesia (YTI/POPTI) branch of Yogyakarta and the Faculty of Biology UGM. Research subjects consisted of 8 mens and 20 womens with an age range 1-37 years, who had the inclusion criteria and normal control. DNA was isolated from the blood of each individual and amplified using forward 5’-AGAAGTCTGCCGTTACTGCC-3’ and reverse 5’-AGGCCATCACTAAAGGCACC-3’ primers in the HBB gene sequences. The amplification product then analyzed by RFLP technique using the MnlI restriction enzyme. Interpretation of the data is done by comparing the differences in the size and number of DNA fragments digested between normal individuals and suspect carrier, then analyzed with the results of hematological analysis. The results showed that 10 individuals (35,71%) with abnormalities on the corpuscular indices and the peripheral blood picture of hematological analysis confirmed as HbE carrier using RFLP, while HbE disease is not found. RFLP with the MnlI restriction enzyme can be used as a confirmatory test to the results of hematological analysis of HbE carrier.

Kata Kunci : HbE, mutasi, skrining thalassemia, analisis hematologis, RFLP