ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL DPPH DAN IMUNOMODULATOR DARI BUAH KASTURI (Mangifera casturi Kosterm.) SUKU ANACARDIACEAE

sutomo, Prof. Dr. Subagus Wahyuono, M.Sc., Apt.

2014 | Tesis | S3 Ilmu Farmasi

Kasturi (Mangifera casturi Kosterm.) merupakan tumbuhan khas daerah Kalimantan dengan nama lokal mangga Kalimantan. Bagian yang digunakan untuk penelitian ini adalah buah masak yang diambil dari daerah Kalimantan Selatan Indonesia. Pada penelitian ini dilakukan ekstraksi, fraksinasi, isolasi, identifikasi, dan uji aktivitas buah M. casturi. Uji aktivitas penangkap radikal DPPH dilakukan terhadap ekstrak, fraksi, dan senyawa hasil isolasi sedangkan uji aktivitas imunomodulator hanya dilakukan terhadap senyawa hasil isolasi. Tujuan penelitian ini adalah melakukan isolasi senyawa aktif dari buah M. casturi sebagai penangkap radikal DPPH dan imunomodulator. Uji aktivitas imunomodulator bertujuan untuk mengetahui apakah isolat dari buah kasturi mempunyai aktivitas sebagai imunomodulator oleh karena itu hasil uji dibandingkan dengan kontrol negatif bukan kontrol positif. Ekstraksi dilakukan terhadap simplisia kering daging buah bersama kulitnya dengan pelarut metanol menggunakan metode maserasi. Fraksinasi dilakukan dengan metode cair-cair melalui fraksinasi bertingkat menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat, dan metanol. Pemantauan golongan senyawa dan aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis menggunakan pereaksi spesifik. Isolasi dilakukan terhadap senyawa yang teridentifikasi sebagai antioksidan menggunakan metode kromatografi kolom gravitasi. Uji aktivitas penagkapan radikal dilakukan dengan metode 2,2-diphenyl- 1- picrylhydrazyl (DPPH) terhadap ekstrak, fraksi, dan senyawa hasil isolasi sedangkan uji aktivitas imunomodulator dilakukan secara in-vitro terhadap senyawa hasil isolasi. Parameter antioksidan didasarkan pada kemampuan ekstrak atau isolat dalam reaksi penangkapan radikal sedangkan sifat imunomodulator didasarkan pada kemampuan isolat mempengaruhi aktivitas makrofag. Elusidasi struktur dilakukan menggunakan spektroskopi UV-Vis, FTIR, LCMS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, COSY, HMQC, dan HMBC. Aktivitas antioksidan paling kuat adalah isolat 3 (IC50=2,35±0,02 μg/mL) diikuti oleh fraksi etil asetat (IC50=6,0±0,03 μg/mL), ekstrak metanol (IC50=112,4±0,62 μg/mL), fraksi n-heksana (IC50 =193,0±0,19 μg/mL), fraksi metanol (IC50= 538,9±0,41 μg/mL), isolat 2 (IC50= 12.242,7±5,19 μg/mL), dan isolat 1 (IC50=14.384,7±4,81 μg/mL). Aktivitas imunomodulator isolat 1 dosis 100 μg/mL berdampak signifikan terhadap rasio fagositasi dan indek fagositasi. Isolat 2 dosis 12,5-50 μg/mL berdampak signifikan terhadap rasio fagositasi dan pada dosis 12,5 μg/mL berdampak signifikan terhadap indek fagositasi. Aktivitas imunomodulator isolat 3 yang diberikan dengan dosis 6,25-25 μg/mL berdampak signifikan terhadap rasio fagositasi maupun indek fagositasi. Identifikasi struktur kimia dari senyawa hasil isolasi diketahui bahwa isolat 1 adalah 1-Isopropenyl- 3a,5a,5b,8,8,11a-hexamethyl-eicosahydro-cyclo penta [a]chrysen-9-ol (lupeol), isolat 2 adalah 17-(4-Ethyl-1,5-dimethyl-hexyl)-10,13-dimethyl-2,3,4,7,8,9,10,11, 12,13,14,15,16,17–tetradecahydro-1H-cyclopenta [a] phenan thren-3-ol (β-sitos terol), dan isolat 3 adalah 3,4,5-trihydroxy-benzoic acid methyl ester (metilgalat). Kata kunci : Mangifera casturi Kosterm, isolasi, antioksidan, imunomodulator, lupeol, β-sitosterol, metilgalat

Casturi (Mangifera casturi Kosterm) is one of the Borneo-typical plants with local name of Berneo mango. The part used in this study was ripe fruit taken from South Borneo, Indonesia. In the study, the extraction, fractionation, isolation, identification, and activity tests of M. Casturi fruit were carried out. Radical scavenger activity test was carried out on the extract, fraction and compound as the results of isolation, while immunomodulator activity test was only carried out on compound as the results of isolation. The aim of the study is to isolate the active compound of M. casturi fruit as radical scavenger and immunomodulator. The immunomodulator activity test was carried out to find out whether or not the isolates of casturi fruit have activity as immunomodulator, so that the results of the test was compared to those of negative control but not of positive control. Extractions of the dried simplisia of fleshy meat and the skin were carried out using methanol solution by a maceration method. Fractionation was done by a liquid-liquid method through a stratified fractionation using n-hexane, etilacetate, and methanol solutions. The monitoring of compound and antioxidant group was done using a thin layer chromatography by specific reactan. The isolation of compounds identified as antioxidant was done using a preparative thin layer chromatography, vacuum liquid chromatography, and gravitational column chromatography. The radical scavenger test was done by 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl (DPPH) method, while the immunomodulator activity test was done in-vitro. Antioxidant parameters were based on the capacity of extracts or isolates in the reaction of capturing radicals, while the properties of immunomodulator were based on the capacity of isolates in affecting the activity of macrophage. The elucidation of structure was done using the spectroscopy of UV-Vis, FTIR, LCMS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, COSY, HMQC, dan HMBC. The strongest antioxydant activity was identified in isolate 3 (IC50=2.35±0.02 μg/mL), followed by etilacetate fraction (IC50=6.0±0.03 μg/mL), methanol extracts (IC50=112.4±0.62 μg/mL), n-hexane fraction (IC50=193.0±0.19 μg/mL), methanol fraction (IC50=538.9±0.41 μg/mL), isolate 2 (IC50= 12,242.7 ±5.19 μg/mL), and isolate 1 (IC50=14,384.7±4.81 μg/mL). The immunomodulator activity of isolate 1 with the dosis of 100 μg/mL had a significant effect on phagocitation ratio and phagocitation index. The activity of isolat 2 with the dosis of 12.5-50 μg/mL had a significant effect on phagocitation ratio and with dosis of 12.5 μg/mL had a significant effect on phagocitation index. The immunomodulator activity of isolate 3 with the dosis of 6.25-25 μg/mL had a significant effect on phagocitation ratio and phagocitation index. Based on the identification of the chemical structure of the compound as the results of isolation, it can be found out that isolate 1 was 1-Isopropenyl-3a,5a,5b,8,8,11a-hexamethyleicosahydro- cyclo penta [a]chrysen-9-ol (lupeol), isolate 2 was 17-(4-Ethyl-1,5- dimethyl-hexyl)-10,13-dimethyl-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17–tetradecahydro- 1H-cyclopenta [a] phenan thren-3-ol (β-sitosterol), and isolate 3 was 3,4,5- trihydroxy-benzoic acid methyl ester (methylgallat). Keyword : Mangifera casturi Kosterm, isolasi, antioksidan, imunomodulator, lupeol, β-sitosterol, methylgallat

Kata Kunci : Mangifera casturi Kosterm, isolasi, antioksidan, imunomodulator, lupeol, β-sitosterol, metilgalat; Mangifera casturi Kosterm, isolasi, antioksidan, imunomodulator, lupeol, β-sitosterol, methylgallat