ANALISIS KONTAMINASI DNA BABI PADA ABON DENGAN PRIMER MITOKONDRIA D-LOOP22 MENGGUNAKAN METODE REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION

Rahmawati Taufiq, Prof. Dr. Sismindari, S.U., Apt

2014 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Makanan berbahan dasar daging seperti abon menjadi salah satu target utama pemalsuan di pasaran dan seringkali daging babi dipakai sebagai bahan pencampur. Hal ini menjadi kontradiktif dari segi agama Islam karena Al Qur‟an secara jelas melarang umatnya mengkonsumsi daging babi, sedangkan dari segi kesehatan karena adanya reaksi alergi bagi sebagian orang yang hipersensitivitas terhadap daging babi. Untuk mengatasi masalah ini, perlu dikembangkan suatu metode yang secara spesifik dapat mendeteksi target DNA babi di antara DNA hewan lainnya meskipun dalam jumlah yang sangat kecil. Analisis dilakukan dengan cara melakukan amplifikasi DNA babi menggunakan metode real time PCR dengan primer yang didesain berdasarkan daerah mitokondria D-loop babi, di mana primer tersebut dapat mengamplifikasi DNA target pada urutan basa ke 22 – 197 dengan amplikon 176 pb. Uji spesifitas dilakukan terhadap jaringan segar (babi, sapi, ayam, kambing dan kuda) dan terhadap abon campuran babi:sapi (konsentrasi 0,5; 1; 3; 5 dan 10%). Uji sensitivitas dilakukan terhadap abon babi 100% (konsentrasi 10000, 1000, 100, 10, 5 dan 1 pg). Uji keterulangan dilakukan terhadap abon babi 100% dan abon campuran babi:sapi dengan konsentrasi yg sama di atas. Hasil analisis menunjukkan bahwa primer mitokondria D-loop22 dengan metode real time PCR secara spesifik dapat mendeteksi target DNA babi pada jaringan segar 5 spesies hewan (babi, sapi, ayam, kambing dan kuda) maupun abon campuran babi:sapi. Batas deteksi DNA babi pada abon babi 100% adalah 10 pg sedangkan pada abon campuran babi:sapi adalah 0,5%. Nilai koefisien variasi (CV) rata-rata pada analisis keterulangan pada abon babi 100% adalah 16,28%, pada abon campuran babi:sapi adalah 7,46%. Analisis DNA babi pada abon sapi pasaran tidak memperlihatkan adanya amplifikasi.

The foods basically made from meat such as shredded meat (abon) is one of the main targets of food forgery in market and pork is frequently used as the mixing material. Such practice is contradictory because Islam in Quran clearly prohibits Islamic community to consume the pork, in views of health aspect due to allergic reaction among peoples highly hipersensitive to pork and of vegetarian life style. To overcome the problem, a method should be developed to specifically detect the target pig DNA among other animals DNA although in a very small content. The analysis was performed by doing the pig DNA amplification using the real time PCR method with primers designed based on the D-loop mitochondrial region of pig, where the primers can amplify the target DNA at 22nd-197th basal orders with the amplicon of 176 pb. The specificity test was done on fresh tissues of pig, cow, chicken, goat and horse) and on the mixed shredded meat of pork: beef (the concentrations of 0.5; 1; 3; 5 and 10%). The detection limit test was done on 100% shredded pork (the concentrations of 10000, 1000, 100, 10, 5 and 1 pg) and on the mixed shredded meat of pork:beef (the concentrations of 0.5; 1; 3; 5 and 10%). The repeatability test was done on 100% shredded pork and the mixed shredded meat of pork:beef with the same concentrations above. The results of analysis by using the real time PCR method indicate that the mitochondrial D-loop22 primers can specifically detect the target pig DNA on both fresh tissues and the mixed shredded meat of pork:beef. The detection limit of pig DNA on the shredded pork was 10 pg, while on the mixed shredded meat of pork:beef was 0.5%. The value of the coefficient of variation (CV) on shredded pork was 16.28%, while that on the mixed shredded meatof pork:beef was 7.46%. The analysis of pig DNA on shredded beef in market did not show the presence of amplification.

Kata Kunci : abon, primer mitokondria D-loop22, real time PCR