ANALISIS PLOIDI PLANTLET ANGGREK TANAH HIBRID (Spathoglottis x Bintang Segunung) HASIL KULTUR OVARIUM SECARA IN-VITRO

AGUS SETIAWAN, Dr. Budi Setiadi Daryono, M.Agr.Sc

2014 | Skripsi | BIOLOGI

Mikropropagasi pada tanaman anggrek tanah hibrid Spathoglottis x Bintang Segunung dari Indonesia telah dilakukan. Tujuan penelitian ini yaitu untuk mengetahui konsentrasi optimal senyawa 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), dan 6-Benzylaminopurine (BAP), serta perlakuan cold shock untuk meregenerasi plantlet dari kultur ovarium dan analisis ploidi menggunakan flow cytometry. Eksplan ovarium dari kuntum bunga ke-3 dari yang sudah mekar dikultur pada medium Vacin and Went (VW) yang mengandung 2,4-D dengan 5 variasi konsentrasi yaitu 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, dan 1 (ppm) sedangkan perlakuan cold shock setelah eksplan dikultur dengan 3 variasi lama perlakuan pada 10oC yaitu 0, 2, dan 4 jam. Setelah 10 hari, eksplan ovarium disubkultur ke medium VW yang mengandung 5 variasi konsentrasi BAP yaitu 0.5, 1, 1.5, 2, dan 2.5 (ppm) selama 2 minggu. Kemudian eksplan ovarium disubkultur kembali pada medium VW+ 150 (ml/L) air kelapa segar yang telah disaring. Eksplan ovarium anggrek pada medium VW+1 ppm 2,4-D (Sig= 2%)+ 4 jam perlakuan cold shock 10oC (Sig=2%) dan VW+2,5 ppm BAP (Sig=0,62%) mampu beregenerasi membentuk Protocorm-like bodies (PLBs). Berdasarkan prosedur tersebut dibutuhkan waktu 2 bulan hingga PLB membentuk plantlet. Metode flow cytometry digunakan untuk menganalisis ploidi eksplan daun invitroplant yang beregenerasi dari kultur ovarium dan kontrol menggunakan buffer Otto. Berdasarkan analisis flow cytometry diketahui bahwa ploidi plantlet yang berkembang dari ovarium S. x Bintang Segunung (CV peak= 4,35%) hasil kultur in-vitro sama dengan ploidi tanaman S. x Bintang Segunung normal (CV peak= 5,19%) yaitu triploid berdasarkan tanaman pembanding yaitu Spathoglottis plicata (CV peak= 5,42%) sebagai diploid. Berdasarkan penelitian ini dapat disimpulkan bahwa metode yang digunakan mampu menghasilkan plantlet yang beregenerasi dari sel somatik anggrek S. x Bintang Segunung dan mempunyai efek yang positif terhadap perkembangan sel ovul tetapi diperlukan optimasi medium lebih lanjut untuk menginduksi sel ovul menjadi plantlet.

A rapid and efficient micropropagation method was esthablished for produced Orchid Hybrid Spathoglottis x Bintang Segunung from Indonesia. The aim of this research was to optimize effects of 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), cold shock, and 6-Benzylaminopurine (BAP) to plantlet regeneration from ovarium culture and analyse the ploidy using flow cytometry. Ovarium explants from anthesis flower stalk were cultured on Vacin and Went (VW) medium supplemented with 2,4-D at 5 concentrations (0.01-1 ppm) and cold shock treatment after cultured at 3 variations 10oC (0, 2, and 4 h) and then incubate the explants in room with 24 photoperiodization (±25oC). After 10 days, while ovarium explants were subcultured on VW supplemented with 6-benzylaminopurin (BAP) at 5 concentrations 0.5-2.5 ppm until 2 weeks. Further, ovarium explants were subcultured again on VW medium with filtered coconut water (150 ml/L). Regeneration of protocorm-like bodies (PLBs) and subsequent plantlet development were observed from on VW+ 1 ppm 2,4-D (Sig= 2%)+ 4h cold shock 10oC (Sig= 2%) dan 2,5 ppm BAP (Sig= 0,62%). The optimized procedure required about 2 months from cultured of the ovarium explant to plantlet formation. The peak from the histogram of flow cytometry showed that ovarium cultured of S. x Bintang Segunung (CV= 4,35%) and leave of S. x Bintang Segunung (CV= 5,19%) were the same triploid. The protocol of this experiment could produce the uniform plantlets and expected to initiate the regeneration of ovul cell which need more studying for the medium optimation.

Kata Kunci : Spathoglottis x Bintang Segunung, flow cytometry, kultur ovarium