PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI MERKURI REDUKTASE Isolat Streptomyces spp. RIZOSFER RUMPUT TEKI DI DAERAH TERCEMAR MERKURI

HANUM MUKTI RAHAYU, Dr. Yekti Asih Purwestri, S.Si, M.Si

2014 | Tesis | S2 Biologi

Purifikasi dan karakterisasi merkuri reduktase empat isolat anggota genus Streptomyces resisten merkuri (Streptomyces sp. AS1, Streptomyces sp. AS2, Streptomyces sp. AS6, dan Streptomyces sp. BR28) telah dilakukan. Cell-free extract diperoleh dengan pemecahan sel menggunakan pasir laut pada suhu 4 °C dilanjutkan dengan proses sentrifugasi. Purifikasi merkuri reduktase dilakukan secara bertahap menggunakan amonium sulfat, dialisis dan kromatografi kolom (DEAE Sepharose anion column chromatography). Aktivitas merkuri reduktase diukur pada berbagai kondisi suhu dan pH didasarkan pada jumlah NADPH2 yang teroksidasi menjadi NADP per mg protein per menit dengan menggunakan spektrofotometer. Berat molekul enzim ditentukan menggunakan SDS-PAGE. Hasil penelitian menunjukkan Streptomyces sp. BR28 memiliki aktivitas spesifik merkuri reduktase paling tinggi yaitu 56,94 U/mg protein. Hasil pengukuran aktivitas merkuri reduktase pada berbagai variasi pH dan suhu menunjukkan aktivitas merkuri reduktase Streptomyces sp. BR28 tertinggi pada pH optimum 7,5 dan suhu optimum 80 °C. Aktivitas spesifik merkuri reduktase hasil kromatografi kolom yaitu 21918,95 U/mg protein dengan tingkat kemurnian 431,87 kali aktivitas spesifik cell-free extract. Hasil SDS PAGE menunjukkan Streptomyces sp. BR28 memiliki pita protein yang diduga merkuri reduktase. Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa empat isolat anggota genus Streptomyces resisten merkuri tersebut memiliki merkuri reduktase sehingga berpotensi sebagai agen bioremediasi.

Purification and characterization mercuric reductase four isolates Streptomyces (Streptomyces sp. AS1, Streptomyces sp. AS2, Streptomyces sp. AS6, and Streptomyces sp. BR28) have been investigated. Cell free extract was obtained by disrupting cells using sea sand at 4 °C and followed by centrifugation. Mercuric reductase was purified by ammonium sulfat precipitation, dialysis, and chromatography column (DEAE Sepharose anion column chromatography). Determination pH and temperature optimum of mercuric reductase activity based on the number of NADPH2 oxidized to NADP per mg protein per minute by using a spectrophotometer. Molecular weight mercuric reductase determined using SDS-PAGE. The result showed spesific activity of mercuric reductase Streptomyces sp. BR28 was the highest. The optimum pH and temperature cellfree extract enzyme mercuric reductase were 7,5 and 80 °C, respectively. The enzyme was purified to 431,87-fold with spesific activity 21918,95 U/mg protein. SDS PAGE showed that Streptomyces sp. BR 28 has mercuric reductase. It can be concluded that Streptomyces isolates have mercuric reductase and be potential as a bioremediation agent.

Kata Kunci : Merkuri, Merkuri Reduktase, Streptomyces