ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL 2,2-DIFENIL-1-PIKRILHIDRAZIL DALAM DAUN KELOR (Moringa oleifera, Lamk.)

BETA RIA ERIKA MARITA DELLIMA, Prof. Dr. Sugeng Riyanto, M.S., Apt

2014 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Radikal bebas diduga sebagai mediator berbagai penyakit degeneratif. Antioksidan dapat menangkap radikal bebas dan mendetoksifikasinya. Salah satu tanaman yang berpotensi sebagai antioksidan alami adalah kelor (Moringa oleifera, Lamk). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas penangkapan radikal 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), kandungan fenolik dan flavonoid total ekstrak daun kelor dan fraksi-fraksinya serta melakukan isolasi komponen aktif penangkap radikal dalam daun kelor. Serbuk kering daun kelor dimaserasi dengan etanol 80%. Maserat yang dihasilkan kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator dan disebut sebagai ekstrak etanol daun kelor. Ekstrak tersebut kemudian dipartisi menggunakan pelarut n-heksan, etil asetat dan air. Hasil partisi kemudian dipekatkan sehingga diperoleh ekstrak n-heksan, ekstrak etil asetat dan ekstrak air. Semua ekstrak daun kelor ditentukan aktivitas penangkapan radikal DPPH, kandungan fenolik total dan flavonoid total secara spektrofotometri. Ekstrak teraktif (ekstrak etil asetat) difraksinasi dengan kromatografi cair vakum menggunakan fase diam silika gel Merck 1.07734.1000 berukuran 0,063-0,200 mm dan fase gerak terdiri dari n-heksan, kloroform, etil asetat, metanol dalam berbagai komposisi. Dari fraksinasi ekstrak etil asetat daun kelor diperoleh 12 fraksi. Fraksi ke-12 sebagai fraksi teraktif penangkap radikal bebas kemudian dihidrolisis dan dilanjutkan dengan proses isolasi menggunakan kromatografi kolom gravitasi dengan fase diam silika gel Merck 1.09385.1000 berukuran 0,040-0,063 mm dengan fase gerak terdiri dari kloroform, etil asetat, dan metanol dalam berbagai komposisi. Isolat yang berwarna kuning pada efluen 35-38 diuji kemurniannya dan diidentifikasi secara spektrofotometri UV, kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) detektor photodiode array, spektrofotometri infrared (IR), serta spektrometri massa. Fraksi teraktif (fraksi 12) mempunyai nilai IC50 sebesar 15,02 μg/mL, kandungan fenolik total sebesar 11,14 % b/b ekivalen asam galat (EAG), dan kandungan flavonoid total sebesar 44,01 % b/b ekivalen rutin (ER). Identifikasi menggunakan spektrofotometri UV, IR dan massa menunjukkan bahwa isolat yang terdapat dalam efluen 35-38 dari hasil hidrolisis fraksi 12 ekstrak etil asetat mengandung aglikon kuersetin.

Free radical is suspected as mediator of various degenerative diseases. Antioxidant can scavenge the free radical and detoxify it. One of the potential plant developed as natural antioxidant is kelor (Moringa oleifera, Lamk). The aims of this research were to evaluate the activity of radical scavenging of 2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), the contents of phenolic total and flavonoid total of kelor leaves extract and its fractions and to isolate the active component responsible for DPPH radical scavenging activity. Dry powder of kelor leaves was macerated using ethanol 80%. Macerate was concentrated using rotary evaporator and called as ethanol extract of kelor leaves. The extract was partitioned using n-hexane, ethyl acetate, and water. The result of the partition was then concentrated in order to get n-hexane, ethyl acetate and water extracts. All kelor leaves extract was determined for its activity of radical scavenging of DPPH, the contents of total phenolic and total flavonoid by spectrophotometry. The most active extract (ethyl acetate extract) was subsequently fractionated using vacuum liquid chromatography with stationary phase of Merck gel silica 1.07734.1000 sized 0.063-0.200 and the mobile phase consisted of n-hexane, chloroform, ethyl acetate, and methanol in various composition. The fractionation of ethyl acetate extract of kelor leaves yielded 12 fractions. Fraction number 12, as the most active fraction of free radical scavenger, was then hydrolyzed and continued with isolation process using column chromatography with stationary phase of Merck gel silica 1.09385.1000 sized 0.040-0.063 with the mobile phase consisted of chloroform, ethyl acetate, and methanol in various composition. Yellow isolate on effluent 35-38 was tested for its purity and identified using UV spectrophotometry, high performance liquid chromatography (HPLC) photodiode array detector, infrared (IR) spectrophotometry, and mass spectrometry. The most active fraction (fraction no. 12) had IC50 value of 15.02 μg/mL, while the contents of total phenolic and total flavonoid were 11.14 % wt/wt gallic acid equivalent and 44.01 % wt/wt rutin equivalent. Identification using UV, IR and mass spectrometry showed that the isolate in effluent 35-38 contained quercetin aglycone.

Kata Kunci : daun kelor, isolasi, senyawa penangkap radikal DPPH, fenolik total, flavonoid total.