KARAKTERISASI ISOLAT Streptomyces spp. PENGHASIL INDOLE-3-ACETIC ACID SEBAGAI AGEN BIOSTIMULAN

Charlie Ester de Fretes, Dr. Yekti Asih Purwestri, S.Si., M.Si.

2013 | Tesis | S2 Biologi

Dua puluh enam isolat Streptomyces spp. yang diperoleh dari rhizosfer Cyperus rotundus L. diuji kemampuannya dalam menghasilkan indole-3-acetic acid (IAA) dalam medium yeast malt extract (YM) dengan penambahan triptofan 2 mg/mL. Screening isolat Streptomyces spp. yang mampu menghasilkan IAA dilakukan secara kualitatif dengan penambahan reagen Salkowski pada kultur bakteri dan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT), sedangkan secara kuantitatif dengan metode spektrofotometri pada λ 530 nm. Untuk mengetahui adanya produksi IAA pada isolat Streptomyces spp., maka dilakukan deteksi gen yang terlibat dalam biosintesis IAA dengan amplifikasi gen Tryptophan Monooxigenase (iaaM). Pengujian pengaruh triptofan terhadap produksi IAA dilakukan dengan penambahan triptofan dengan konsentrasi berbeda (0, 1, 2, 3, 4, 5 mg/mL) pada kultur bakteri. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat 2 isolat Streptomyces spp. yang mampu menghasilkan IAA yaitu Streptomyces sp. MS1 (125,48 μg/mL) dan Streptomyces sp. BR27 (104,13 μg/mL). Hasil KLT menunjukan bahwa pada kedua isolat terdapat senyawa yang memiliki nilai Rf yang sama dengan IAA sintetik. Pada kedua isolat tersebut dapat dideteksi adanya gen iaaM, yang menunjukan bahwa biosintesis IAA terjadi pada kedua isolat melalui jalur indole-3-acetamide (IAM). Streptomyces sp. MS1 dan Streptomyces sp. BR27 mampu menghasilkan IAA setelah diinkubasi 24 jam dan tertinggi pada waktu inkubasi 120 jam dengan konsentrasi triptofan masing-masing 2 mg/mL dan 1 mg/mL. Hal ini menunjukkan bahwa isolat Streptomyces spp. mampu menghasilkan IAA sehingga berpotensi dijadikan sebagai agen biostimulan.

Twenty six isolates of Streptomyces spp. obtained from Cyperus rotundus L. was tested for ability to produce indole-3-acetic acid (IAA) in yeast malt extract (YM) medium with 2 mg/mL tryptophan. Screening of the isolate for ability to produce IAA was done qualitatively by added Salkowski reagent in bacteria culture and using Thin Layer Chromatography (TLC) method but quantitatively was determine by spectrophotometer at λ 530 nm. To ensure the IAA production in Streptomyces isolates, gene involved in IAA biosynthesis was detected by amplifying Tryptophan Monooxigenase (iaaM) gene with PCR method. The study of the effect of tryptophan on the production of IAA was at different concentration of tryptophan (0, 1, 2, 3, 4, 5 mg/mL) in the bacterial culture. The result showed that there were two Streptomyces spp. isolates which could produce IAA, namely the isolates of Streptomyces sp. MS1 (125,48 μg/mL) and Streptomyces sp. BR27 (104,13 μg/mL). The TLC result showed that the compound in both isolates was identified to be IAA. The amplification results showed that iaaM gene was detected in both isolates. This results indicated that the IAM pathway is involved in the biosynthesis of IAA in the isolates. Both of the isolates were able to produce IAA after 24 h incubation and the highest production was at 120 h incubation with the concentration of tryptophan was 2 mg/mL dan 1 mg/mL, respectively. Therefore, it can be showed that Streptomyces spp. isolates are able to produce IAA and potentially to be utilized as biostimulat agent

Kata Kunci : Streptomyces spp., indole-3-acetic acid (IAA), indole-3-acetamide (IAM), gen Tryptophan Monooxigenase (iaaM)