Peningkatan Efek Sitotoksik Cisplatin oleh Fraksi Etil Asetat Kayu Secang (Caesalpinia sappan L.) pada Sel HeLa melalui Induksi Apoptosis dan Modulasi Siklus Sel

Ulfatul Husnaa, Prof. Dr. Edy Meiyanto, M.Si.Apt

2013 | Tesis | S2 Bioteknologi

Kanker serviks menjadi penyakit ketiga terbesar pada wanita di dunia dan menyebabkan kematian 80-85% di negara berpendapatan rendah dan menengah. Kemoterapi kanker serviks seringkali menggunakan cisplatin yang dianggap cukup efektif. Permasalahan utama penggunaan cisplatin dapat menyebabkan efek samping yang sangat berbahaya dan menimbulkan resistensi sel kanker. Oleh karena itu, upaya penggunaan bahan dari tanaman yang mempunyai toksisitas rendah memberikan harapan sebagai agen kombinasi cisplatin (ko-kemoterapi) yang dapat meningkatkan toksisitas dengan menurunkan dosis agen kemoterapi. Salah satu tanaman yang potensial yaitu Caesalpinia sappan (C. sappan) yang mengandung senyawa utama brazilin dan brazilein dan telah diketahui memiliki efek sitotoksik pada sel kanker serviks. Kedua senyawa utama C. sappan dapat larut di dalam fraksi etil asetat. Pada penelitian ini dilakukan uji efek sitotoksik fraksi etil asetat C. sappan dan kombinasinya dengan cisplatin dalam menurunkan viabilitas sel HeLa menggunakan metode MTT. Peningkatan efek sitotoksik fraksi etil asetat C. sappan terhadap cisplatin dikonfirmasi menggunakan flow cytometry untuk mengetahui persentase kematian sel dan profil siklus sel melalui efek stabilisasi protein p53. Ekspresi p53 dianalisis menggunakan imunositokimia. Fraksi etil asetat C. sappan menunjukkan efek sitotoksik pada sel HeLa, dengan nilai IC50 sebesar 65±1,5μg/ml. Kombinasi fraksi etil asetat C. sappan dengan cisplatin menurunkan viabilitas sel hingga 36,86%. Kombinasi fraksi etil asetat C. sappan dengan cisplatin menyebabkan berhentinya siklus sel pada fase S dan G2/M melalui stabilisasi p53, tetapi tidak menunjukkan peningkatan apoptosis. Hasil tersebut memberikan bukti pendukung bahwa fraksi etil asetat C. sappan dapat dikembangkan sebagai agen ko-kemoterapi dengan cisplatin dalam meningkatkan efektivitas pengobatan kanker serviks. Oleh karena itu, kajian lebih lanjut diperlukan untuk mengetahui jalur mekanisme molekularnya.

Cercival cancer evidence is being the third most common cancer in woman worldwide. Globally, 80 to 85% of deaths occur in low-income or middleincome countries. Chemoterapheutic agent uses are found to be effective to tread cervical cancer. The main problem of cisplatin causes significant side effect and cellular resistant problem. New effort is using natural compound with low or moderate toxicity as chemotherapeutic agents of combination with cisplatin with low doses to increase cytotoxic effect of cisplatin. Caesalpinia sappan (C. sappan) is one of potential plant of which the main compounds both of brazilin and brazilein performs cytotoxic effects on cervical cancer cells. Both of compounds soluble in ethyl acetate fraction. The present study was carried out to investigate the cytotoxic activities of ethyl acetate fraction of C. sappan alone and in combination with cisplatin. Cytotoxic activity was evaluated by MTT assay. Cell cycle and cell death analysis was performed by flow cytometry and p53 expression by immunocytochemistry. Ethyl acetate fraction of C. sappan performs cytotoxic effect on HeLa cells with decreasing of cells viability in dose dependent manner, gave IC50 value of 65±1.5μg/ml. Combination of ethyl acetate fraction of C. sappan with cisplatin decreased cell viability up to 36.86%. Further assay indicated that this combination caused cell cycle arrest in S and G2/M phase through p53 stabilization, but not increase apoptosis induction. These results provide scientific evidence that ethyl acetate fraction of C. sappan is potential developed as cochemotherapeutic agent with cisplatin in improving medical effectiveness of cervical cancer. Therefore, further study on its molecular mechanism needs to be done.

Kata Kunci : fraksi etil asetat Caesalpinia sappan, ko-kemoterapi, sel HeLa, sitotoksisitas