UJI AKTIVITAS KITINASE ISOLAT - ISOLAT BAKTERI YANG DIISOLASI DARI PETIS UDANG

ENY ORINDA, Bapak Dr. Ir. Iwan Yusuf B.L., M.Sc.

2013 | Skripsi | TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kurva pertumbuhan, produksi protein ekstraseluler dan uji aktivitas kitinase pada medium kitin cair dari lima isolat bakteri kitinolitik; purifikasi parsial kitinase isolat terpilih dengan presipitasi amonium sulfat dan dialisis; serta karakteristik kitinase pada berbagai suhu (30-55oC) dan pH (4-9). Pengujian aktivitas kitinase secara kualitatif dilakukan dengan pengukuran indeks kitinolitik pada medium kitin agar. Nilai Indeks Kitinolitik (IK) kelima isolat (SDI23, MDR23, SDI15, SDI13 dan BLT12) masih menunjukkan aktivitas kitinase ≥ 2. Sedangkan pengujian secara kuantitatif dilakukan dengan mengukur jumlah N-asetil glukosamin yang dihasilkan dari reduksi kitinase dengan substrat koloidal kitin. Kelima isolat ditumbuhkan pada medium kitin cair dengan suhu inkubasi 37oC selama 96 jam. Pengamatan terhadap pertumbuhan, produksi protein ekstraseluler dan aktivitas kitinase dilakukan tiap 12 jam. Isolat SDI23, MDR23, SDI15 dan BLT12 menunjukkan pertumbuhan optimun pada jam ke-48, sedangkan isolat SDI13 optimum pada jam ke- 24. Kandungan protein ekstraseluler tertinggi dihasilkan oleh isolat SDI15. Aktivitas kitinase terbesar ditunjukkan oleh isolat SDI23 pada jam ke-48 sebesar 0,66 unit/mg. Berdasarkan hasil aktivitas kitinase terbesar isolat SDI23 dipilih sebagai isolat terbaik. Media kultur sebagai ekstrak enzim kasar pada isolat SDI23 dipanen pada jam ke- 48 dan dilakukan presipitasi dengan amonium sulfat bertingkat (20-80%) menghasilkan tingkat kemurnian 1,12 kali pada fraksi 80%. Tahap dialisis menggunakan fraksi protein 80% amonium sulfat meningkatkan kemurnian protein menjadi 1,46 kali. Aktivitas spesifik kitinase isolat SDI23 optimum pada suhu 45oC dan pada pH 6.

The objectives of this research was to determine the growth curve, production of extracellular protein and chitinase activities of five chitinolytic bacterial isolates; partially purification of crude chitinase by ammonium sulfate precipitation and dialysis; and characterization of chitinase at various temperatures (30-55oC) and pH (4-9). The qualitative method to measure chitinase activity was conducted by chitinolytic index measurement on chitin agar medium. The result showed that hitinolytic index values (CI) of five isolates (SDI23, MDR23, SDI15, SDI13 and BLT12) ≥ 2. The quantitative method was performed by measuring the amount of N-asetyl glucosamine produced from the reaction of chitinase and colloidal chitin. Five isolates were grown on chitin liquid medium at 37oC for 96 hours and the observations were made every 12 hours. Isolates SDI23, MDR23, SDI15 and BLT12 showed optimum growth at 48 hours, whereas SDI13 at 24 hours. The highest content of extracellular protein was produced by SDI15. The greatest chitinase activity was shown by isolate SDI23 (0.66 unit/mg) at 48 hours of incubation and was chosen as the best isolate. Crude enzyme prepared from 48 hours culture medium of SDI23 was partially purified by ammonium sulfate precipitation (20-80%) and dialysis. The result showed that protein purity in fraction 80% increased 1,12 times. Phase dialysis using protein fraction of 80% ammonium sulfate resulted in increasing of protein purity 1,46 times. Characterization of chitinase from showed on SDI23 optimum temperature at 45oC and at pH 6.

Kata Kunci : kitinolitik, indeks kitinolitik, aktivitas kitinase