IDENTIFIKASI DAN KARAKTERISASI ISOLAT BAKTERI ASAM LAKTAT POTENSI PROBIOTIK PENSINTESIS CONJUGATED LINOLEIC ACID (CLA)

NOSA SEPTIANA ANINDITA, Widodo, S.P., M.Sc., Ph.D

2013 | Tesis | S2 Bioteknologi

Tujuan penelitian ini adalah identifikasi dan karakterisasi isolat kandidat probiotik dengan kemampuan sintesis senyawa bioaktif CLA. Lima isolat BAL hasil isolasi dari feses bayi yang mengkonsumsi air susu ibu (ASI) eksklusif ditumbuhkan pada MRS agar yang disuplementasi L-cysteine dan diinkubasi pada 37°C selama 48 jam. Koloni yang tumbuh pada media tersebut kemudian dilanjutkan identifikasi fenotipik berbasis morfologi dan biokimia dan genotipik berbasis amplifikasi gen 16S rRNA. Identifikasi fenotipik berdasarkan pada pewarnaan Gram, bentuk, katalase, motilitas, pembentukan spora, produksi CO2, dan kemampuan tumbuh pada variasi suhu, pH dan kadar garam. Identifikasi genotipik berdasarkan pada amplifikasi sekuens gen 16S rRNA. Aplikasi potensi isolat terpilih sebagai probiotik dievaluasi berdasarkan pada kemampuan untuk tumbuh pada media dengan pH 2,0 dan garam empedu, kemampuan penghambatan terhadap patogen, kemampuan penempelan in vitro pada musin babi dan kemampuan memanfaatkan inulin sebagai satu-satunya sumber karbon. Berdasarkan identifikasi seluler, biokimia dan analisis gen 16S rRNA, isolat AP dan AG diklasifikasikan sebagai Lactobacillus casei (99%), sedangkan isolat AA, BE dan BK diklasifikasikan sebagai Pediococcus acidilactici (99%). Evaluasi in vitro probiotik kelima isolat menunjukkan kandidat potensial probiotik in vitro melalui beberapa parameter. Uji kemampuan dalam pemanfaatan prebiotik inulin sebagai sumber karbon menunjukkan bahwa Lactobacillus casei (strain AP dan AG) dan Pediococcus acidilactici strain BE memiliki kemampuan dalam mendegradasi inulin sebagai prebiotik. Seleksi kandidat isolat probiotik dalam sintesis Conjugated Linoleic Acid (CLA) dari asam linoleat bebas menunjukkan bahwa isolat probiotik Lactobacillus casei strain AP mampu mengkonversi lebih dari 60% asam linoleat bebas dalam media menjadi CLA. Data tersebut mengindikasikan bahwa isolat terpilih Lactobacillus casei strain AP merupakan kandidat potensial probiotik in vitro dan produksi CLA.

aims The of this study was to identify and characterize potential probiotics with the ability to synthesize bioactive compounds CLA. Five isolates of LAB isolated from faeces of infants who consumed breast milk as the only source of diet were grown on L-cysteine-supplemented MRS Agar and incubated on 37°C for 48 hours. Colonies grew on this media were then phenotypically identified based on morphological and biochemichal, followed by genotypic identification. Phenotypic identifications based on Gram staining, catalase, motility, spore forming, CO2 production, and the ability to grow on different temperatures, pH and concentration of salt. Genotypic identification relied on the amplification of sequence of 16S rRNA gene. The potential application of selected isolates for probiotics was evaluated based on the ability to grow on media with low pH and bile salts, the ability to inhibit the growth of pathogen, in vitro adherence ability on pig gastric mucin and to utilize inulin as the only carbon source. Based on the identification of cellular, biochemical and 16S rRNA gene analysis, isolates AP and AG were classified as Lactobacillus casei (99%), whereas isolates AA, BE and BK were classified as Pediococcus acidilactici (99%). In vitro evaluation of five isolates showed potential candidate as probiotic through several test parameters. Evaluation on the ability to use prebiotic inulin as carbon source showed that Lactobacillus casei (strain AP and AG) and Pediococcus acidilactici strains BE had the ability to degrade inulin as a prebiotic. Selection of candidate probiotic isolates to synthesize Conjugated Linoleic Acid (CLA) from free linoleic acid showed that Lactobacillus casei strain AP was able to convert more than 60% of free linoleic acid to CLA in the media. The data obtained indicated that the selected isolate Lactobacillus casei strain AP is potential candidate for probiotic application and produce CLA.

Kata Kunci : Probiotik, Lactobacillus casei, Pediococcus acidilactici dan CLA