STANDARISASI TAGITININ C PADA EKSTRAK ETANOL DAUN KEMBANG BULAN [Tithonia diversifolia (Hemsley) A.Gray] DAN EFEK ANTIPROLIFERASINYA TERHADAP SEL WiDR MENGGUNAKAN PARAMETER DOUBLING TIME

OVA SETYA PRIMADA, Prof. Dr. Mae Sri Hartati W., M. Si., Apt.

2013 | Tesis | PENDIDIKAN DOKTER

Latar Belakang: Kembang bulan [Tithonia diversifolia (Hemsley) A. Gray] merupakan tanaman yang digunakan secara luas sebagai obat tradisional dan memiliki potensi sebagai antikanker. Ekstrak etanol 70% daun kembang bulan mengandung senyawa terpenoid dan memiliki sifat toksik terhadap kultur sel WiDR dengan IC50 = 53,19 μg/mL, lebih kuat dibandingkan efek sitotoksik 5-Fluorourasil (5-FU) dengan IC50 = 62,16 μg/mL. Penelitian efek antiproliferasi terhadap sel WiDR perlu dilakukan untuk mendukung pengembangan lebih lanjut ekstrak etanol terstandar daun T. diversifolia sebagai obat antikanker kolorektal. Tujuan: Untuk standarisasi ekstrak etanol daun T. Diversifolia menggunakan marker senyawa aktif Tagitinin C dan mengetahui efek antiproliferasinya terhadap sel WiDR dibandingkan 5-FU menggunakan parameter doubling time. Metode: Penelitian kuasi eksperimental ini menggunakan sel WiDR sebagai subjek penelitian. Standarisasi ekstrak etanol daun T. Diversifolia dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis untuk mengetahui adanya kandungan senyawa aktif Tagitinin C. Bahan uji dibuat dalam 8 seri konsentrasi untuk ekstrak etanol terstandar daun T. diversifolia (0,78125-100 μg/mL) dan 5-FU (0,9375-120 μg/mL). Sel WiDR diberi bahan uji lalu diinkubasi pada suhu 37oC selama 0, 24, 48, dan 72 jam. Tingkat proliferasi diukur dari aktivitas enzim secara kolorimetrik dengan metode MTT dan dibaca absorbansinya menggunakan ELISA reader. Efek antiproliferasi terhadap sel WiDR diamati dengan parameter doubling time. Hasil: Ekstrak etanol daun kembang bulan dapat terstandarisasi menggunakan penanda Tagitinin C dengan nilai Rf = 0,32. Efek antiproliferasi terbaik ekstrak ini terhadap sel WiDR ada pada konsentrasi 1/64 IC50 = 0,78125 μg/mL dengan doubling time 174,1 jam, lebih lama dibanding doubling time terpanjang sel WiDR yang diberi 5-FU yaitu 142,8 jam pada konsentrasi 1/2 IC50 = 30 μg/mL. Kesimpulan: Efek antiproliferasi ekstrak etanol terstandar daun kembang bulan terhadap sel WiDR meningkat seiring penurunan dosis. Doubling time sel WiDR terpanjang terdapat pada kultur yang diberi ekstrak dengan konsentrasi terendah.

Background: Kembang bulan [Tithonia diversifolia (Hemsley) A. Gray] is one of plants which widely used as traditional medicine and has potentiality as anticancer drug. Ethanol extract (70%) of Kembang Bulan‟s leaves contains terpenoid compounds and has a cytotoxic effect to WiDR cells with IC50 = 53,19 μg/mL, stronger compared to cytotoxic effect of 5-Fluorouracil (5-FU) which has IC50 = 62,16 μg/mL. A research about its antiproliferation effect to WiDR cell is needed to support further development of this extract as a colorectal cancer drug. Objectives: To standardize the ethanol extract of T. Diversifolia leaves using Tagitinin C as an active compound marker and find out its antiproliferation effect to WiDR cell compared to 5-FU using doubling time as parameter. Methods: This quasi-experimental research using WiDR cell as research subject. Standardization of T. Diversifolia leaves ethanol extract was done by Thin Layer Chromatography method to reveal Tagitinin C as its active compound. Each sample was made into 8 serial doses for standardized T. Diversifolia leaves ethanol extract (0,78125-100 μg/mL) and 5-FU (0,9375-120 μg/mL), given to WiDR cell and incubated at 37oC for 0, 24, 48, and 72 hours. Proliferation rate was measured by colorimetric enzyme activity using MTT method and the absorbance rate was read using ELISA reader. Antiproliferation effect to WiDR cell was determined using doubling time as parameter. Results: T. Diversifolia leaves ethanol extract was standardized using Tagitinin C as active compound marker with Rf value = 0,32. The best antiproliferation effect of this extract to WiDR cell was found at dose of 1/64 IC50 = 0,78125 μg/mL with 174,1 hours of doubling time, longer than the longest of WiDR cell doubling time which treated by 5-FU, 142,8 hours at dose of 1/2 IC50 = 30 μg/mL. Conclusion: Antiproliferation effect of standardized T. Diversifolia leaves ethanol extract to WiDR cell is dose-dependant. It‟s increasing along with decreasing of the dose respectively. The longest doubling time was found on the smallest dose.

Kata Kunci : Doubling time, Sel WiDR, 5-Fluorourasil, ekstrak etanol terstandar, Tithonia diversifolia