PENGARUH pH, KONSENTRASI SUBSTRAT DAN JENIS DAPAR PADA HIDROLISIS PENISILIN G TERKATALISIS PENISILIN ASILASE DARI Bacillus megaterium

GALIH NUR AFNANI, Dr. Hilda Ismail, M.Si., Apt.

2013 | Skripsi | FARMASI

Kebutuhan antibiotik turunan penisilin di Indonesia sangat tinggi tetapi produksinya masih terkendala oleh bahan baku yang harus diimpor. Bahan baku antibiotik turunan penisilin adalah asam 6-aminopenisilinat (6-APA) yang dapat diperoleh dari hidrolisis penisilin G. Hidrolisis secara enzimatik dengan penisilin asilase lebih efektif dan efisien daripada hidrolisis secara kimiawi. Reaksi hidrolisis enzimatik dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor, antara lain pH, konsentrasi substrat, dan jenis dapar yang digunakan sebagai media reaksi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh faktor-faktor tersebut terhadap hidrolisis penisilin G serta kondisi optimal hidrolisis untuk mendapatkan kadar 6-APA yang tinggi. Penelitian dilakukan dengan menghidrolisis penisilin G menggunakan penisilin asilase amobil dari Bacillus megaterium. Inkubasi dilakukan selama 30 menit dalam dapar fosfat 0,05 M dengan rentang pH 7,0-10,0 dan konsentrasi substrat 5-7% b/v. Setelah diperoleh pH dan konsentrasi substrat optimal, dilakukan hidrolisis dalam dapar Tris. Pengambilan sampel dilakukan pada menit ke-0, 2, 5, 10, 15, 20, 25, dan 30. Sampel dipisahkan dari enzim kemudian dianalisis dengan HPLC Shimadzu CLASS-VP 10A. Luas area di bawah puncak senyawa 6-APA diplotkan pada persamaan kurva baku untuk mengetahui kadar 6- APA yang terbentuk. Kadar 6-APA dari masing-masing perlakuan dibandingkan untuk mengetahui kondisi hidrolisis yang optimal. Berdasarkan hasil penelitian, aktivitas optimal penisilin asilase dari Bacillus megaterium untuk menghidrolisis penisilin G dicapai pada pH 9,0. Konsentrasi substrat optimal untuk hidrolisis penisilin G dengan 120 mg enzim sebesar 5% b/v. Jenis dapar yang optimal untuk hidrolisis penisilin G pada pH 9,0 dengan konsentrasi substrat 5% b/v adalah dapar Tris 0,05 M. Kadar 6-APA yang dihasilkan dari hidrolisis dengan kondisi optimal selama 30 menit sebesar 17,01 mg/mL. Penisilin G yang dapat dikonversi menjadi 6-APA sebanyak 34%.

-

Kata Kunci : penisilin G, penisilin asilase dari Bacillus megaterium, 6-APA, hidrolisis