Pengaruh parachlorophenol dan camphorated parachlorophenol terhadap fagositosis dan produksi nitrit oksida sel makrofag mencit (Sel Raw 264.7)

BARID, Izzata, drg. Soetomo Nawawi, DPH.,Dent.,SpPer

2001 | Tesis | S2 Kedokteran Gigi

Tujuan penelitian ini adalah mengetahui pengaruh parachlorophenol (PCP) dan camphorated parachlorophenol (CMCP) terhadap aktivitas fagositosis dan produksi nitrit oksida (NO) sel makrofag mencit (sel RAW 264.7) secara in vitro. Sel makrofag (2 x 105 sel) diinkubasi dalam medium RPMI 1640 pada piring petri plastik dengan berbagai pengenceran PCP dan CMCP kemudian dihitung jumlah set makrofag yang tidak menempel dan yang menempel. Sel makrofag yang menempel dan tidak menempel diinkubasi dengan bakteri Actinobacillus actinomycetemcomitans. Jumlah bakteri yang difagosit oleh satu sel makrofag dihitung sebagai indeks fagositosis (IP) dibawah mikroskop cahaya. Pada penelitian lain, sel makrofag yang menempel maupun tidak menempel karena inkubasi dengan PCP dan CMCP, distimulasi dengan lipopolisakarida (LPS) bakteri Escherichia coli, setelah stimulasi sel makrofag diinkubasi dengan A. actinomycetemcomitans dan IP dihitung. Kontrol positif diperoleh dari sel makrofag tanpa PCP dan CMCP, distimulasi dengan LPS tersebut dan kemudian diinkubasi dengan bakteri yang sama. Selanjutnya, bakteri A. actinomycetemcomitans diopsonisasi dengan serum mencit tanpa imunisasi dan serum poliklonal antibodi anti-A. actinomycetemcomitans dan kemudian di inkubasi dengan sel makrofag. Guna mengetahui pengaruh PCP dan CMCP terhadap produksi NO sel makrofag mencit, sel makrofag diinkubasi dengan PCP dan CMCP. Sel makrofag yang menempel dan tidak menempel distimulasi dengan LPS-E. coli atau IFN-gamma. Setelah kultur selama 24 jam, supematan kultur dipanen dan level NO dihitung dengan reagent Griess. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan analisa varian (ANAVA). Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa pada pengenceran rendah (1:10) balk PCP maupun CMCP dapat menurunkan kemampuan menempel dari makrofag (p<0,05), dan dapat juga menyebabkan menurunnya IP (p<0,05), sedangkan pemberian opsonisasi dengan serum normal tidak mampu memperbaiki IP pada pengenceran rendah (p<0,05), dan pemberian opsonisasi dengan antibodi poliklonal Anti-Aa tidak mempengaruhi IP (p>.0,05). Pemberian LPS tidak mempengaruhi daya fagositosis set makrofag balk yang diinkubasi dengan PCP atau CMCP dalam berbagai pengenceran (p>0,05). Pada sel makrofag yang diinkubasi dengan pengenceran PCP dan CMCP rendah (1:10) dan distimulasi dengan LPS-E. coil atau IFN-gamma, produksi NO lebih rendah dibanding dengan sel makrofag tanpa inkubasi dengan PCP atau CMCP (p<0.05). Sebaliknya, tidak terdapat perbedaan yang bermakna antara produksi NO dari sel makrofag yang diinkubasi dengan PCP maupun CMCP pengenceren tinggi (1:1000) dibanding dengan sel makrofag tanpa inkubasi dengan kedua komponen phenol tersebut (p>0.05). Kesimpulan yang didapat dari penelitian ini adalah bahwa pada pengenceran rendah , PCP dan CMCP dapat menurunkan kemampuan sel makrofag menempel pada permukaan plastik, fagositosis dan produksi NO.

The aim of this study was to determine the effects of parachlorophenol (PCP) and camphorated parachlorophenol (CMCP) on the phagocytic activities and nitric oxide (NO) production of murine macrophages (RAW264.7 cells) in vitro. Macrophages (2 X 105 cells) in RPMI 1640 medium-containing plastic petri disks were incubated with various concentrations of PCP and CMCP and then, both plastic adherence and non-adherence cells were accounted. Both adherence and non-adherence cells were also incubated with Actinobacillus actinomycetemcomitans Y4 and the numbers of bacteria ingested per 1 macrophage were assessed as phagocytic index (PI) under a light microscope. In the next experiments, PCP and CMCP induced adherence and non-adherence cells were stimulated with 1 1.ig of lipopolysaccharide (LPS) from Escherichia coil prior to incubation with A. actinomycetemcomitans and the PI was then assessed. As a control, the phagocytic activities of PCP- and CMCP-untreated macrophages stimulated with this bacterial LPS were determined against this oral bacterium. Furthermore, A. actinomycetemcomitans opsonized with unimmunized serum or serum anti-A. actinomycetemcomitans polyclonal antibodies were incubated with PCP- and CMCP-treated macrophages and the PI was then accounted. In order to determine NO production, both PCP- and CMCP-induced adherence and non-adherence macrophages were stimulated with 1 lig of LPS-E. coil or 200 units of IFN-gamma and the cells were then cultured for 24 hours. The levels of NO were determined from the culture supernatants using the Griess reagent. An one way analysis of variance was used to analyze the data. The results showed that both PCP and CMCP only diluted in 1:10 led to significantly reduce the adherence capacity of macrophages and decrease PI (p<0.05). At similar dilution of both phenolic compounds, opsonization with unimmunized serum and polyclonal anti-A. actinomycetemcomitans antibodies failed to recover the phagocytic activities of PCP and CMCP treated macrophages (p<0.05 and p>0.05, respectively). LPS activation also failed to upregulate the macrophage phagocytic activities when the cells were incubated with PCP and CMCP diluted in 1:10 (p>0.05). Furthermore, after stimulation with LPS-E. co/i or IFN-gamma, the levels of NO production by macrophages treated only with PCP and CMCP diluted in 1:10 were significantly lower than those by the PCP- and CMCP-untreated cells (p<0.05). The results of the present study indicated that at high concentration, both PCP and CMCP may lead to reduce the plastic adherence capacities, phagocytic activities and NO production of macrophages.

Kata Kunci : Perawatan Endodontik, Parachlorophenol