PENGARUH MARMIN (SENYAWA AKTIF Aegle marmelos Correa.) TERHADAP BEBERAPA RESEPTOR FISIOLOGIS OTOT POLOS ILEUM MARMUT TERISOLASI: STUDI IN VITRO DAN IN SILICO

Puguh Novi Arsito, Prof. Dr. Agung Endro Nugroho, M.Si.,Apt

2013 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Marmin adalah suatu senyawa turunan kumarin yang diisolasi dari kulit batang dan akar Aegle marmelos Correa. Pemberian ekstrak etanolik daun Aegle marmelos Corr pada ileum terisolasi menunjukkan efek antagonisme terhadap kontraksi yang diinduksi oleh histamin. Marmin terbukti dapat menghambat pelepasan histamin pada kultur RBL-2H3. Pada usus selain reseptor histamin, terdapat juga reseptor asetilkolin muskarinik, dan serotonin yang terlibat dalam mekanisme kontraksi ileum. Oleh karena itu marmin diduga memiliki aksi antagonisme pada reseptor-reseptor tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh marmin terhadap kontraksi otot polos ileum marmut terisolasi yang diinduksi agonis histamin, metakolin, dan serotonin. Marmin diberikan dengan dosis 10 μM dan 100 μM. Sementara agonisnya diberikan dengan seri kadar 10-8-10-4 M. Pada uji in vitro ini juga akan dipelajari tipe antagonism dari marmin dan sifat reversibilitasnya pada reseptor. Selain uji in vitro, pada penelitian ini juga dilakukan uji in silico dengan menggunakan program docking PLANTS. Hasil penelitian menunjukkan bahwa marmin mampu menghambat kontraksi otot polos ileum terisolasi yang diinduksi histamin, metakolin dan serotonin. Pada reseptor H1 terjadi pergeseran nilai pD2 yang signifikan (p<0,05) untuk kadar marmin 10 dan 100μM. Nilai pD2 kelompok kontrol, marmin 10 dan 100 μM berturut-turut adalah 6,61; 6,00; dan 5,30. Dari hasil analisis Schild-plot diketahui tipe antagonismenya bersifat kompetitif (slope: 0,801, pA2:2,080). Pada reseptor ACh M3 terjadi pergeseran nilai pD2 yang signifikan (p<0,05) hanya terjadi pada kelompok marmin 100 μM. Nilai pD2 kelompok kontrol, marmin 10 dan 100 μM berturut-turut adalah 6,39; 6,08; 5,46. Dari hasil analisis Schild-plot diketahui tipe antagonismenya bersifat kompetitif (slope: 0,853, pA2:1,728). Sementara terhadap reseptor 5 HT marmin diketahui bersifat antagonis nonkompetitif, pergeseran pD2 bersifat tidak signifikan. Dari uji reversibilitas pada semua reseptor target, diketahui bahwa dengan pencucian organ ileum menngunakan buffer tyrode setiap 6 menit selama 30 menit, ikatan marmin belum terlepas secara sempurna. Pada uji in silico marmin juga diketahui dapat terikat pada reseptor H1 (skor docking: -97,417), dan reseptor ACh M3 (skor docking: -102,086). Ikatan marmin ke reseptor H1 tersebut bersifat lebih lemah jika dibandingkan dengan native ligannya (doksepin, skor docking: -114,825). Ikatan marmin ke reseptor ACh M3 tersebut bersifat lebih lemah jika dibandingkan dengan native ligannya (tiotropium, skor docking: -115,107). Kesimpulan dari penelitian ini adalah marmin memiliki aktivitas antagonis kompetitif pada reseptor H1 dan ACh M3.

Marmin is a coumarin derivative compound isolated from the cortex and the root of Aegle marmelos Correa. Marmin was reported have inhibition effect on histamine release from RBL-2H3 cell culture. In the ileum, there is not only histamine receptor that can contribute on the contraction. But also involve acetylcholine and serotonine receptors. Based on that fact, Marmin was expected to have antagonism action at that receptors. This research was conducted to investigate the effect of marmin on the guinea pig ileum smooth muscle contraction induced by histamine, metacholine and serotonine. Marmin was administered at the doses 10 and 100 μM. The contraction was induced by a graded series of agonis (10-8-10-4 M). On this in vitro study, the type of antagonism and reversibility will be investigated. Besides in vitro study, there is also in silico study in this research using docking PLANTS software. The results showed that marmin able to inhibit contractions of guinea pig ileum smooth muscle that induced by histamine, metacholine and serotonine. In the H1 receptor, marmin at all concentrations were able to shift pD2 significantly (p<0,05). The pD2 value of control, marmin 10 μM and marmin100 μM were 6,61; 6,00; 5,30 respectively. Schild-plot analysis showed that marmin was a competitive antagonist (slope: 0,801, pA2:2,080). In the ACh M3 receptor, only marmin at concentration 100 μM was able to shift pD2 significantly (p<0,05). The pD2 value of control group, marmin 10 and 100 μM were 6,39; 6,08; 5,46 respectively. Schild-plot analysis showed that marmin is a competitive antagonist (slope: 0,853, pA2:1,728). In the 5HT receptor, the results showed that marmin have competitive antagonist effect, but the pD2 shift was not significant. In the reversibility study at all receptors, the results showed that marmin have not totally dissociated after washing period. The washing period was done every 6 minutes during 30 minutes. In the in silico study, marmin can bind to H1 receptor (docking score: -97,417) and ACh M3 receptor (docking score: -102,086). Marmin’s binding energy to the H1 receptor is weaker than native ligand’s (doxepin) binding energy. Marmin’s binding energy to the ACh M3 receptor is also weaker than native ligand’s (tiotropium) binding energy. The conclucion of this research is, marmin has competitive antagonist activity on the H1 and ACh M3 receptors

Kata Kunci : Marmin, ileum marmut terisolasi, reseptor H1, AChM3, antagonis kompetitif