IDENTIFIKASI ISOLAT Mycobacterium tuberculosis DENGAN KONSENTRASI DNA BERTINGKAT MENGGUNAKAN TEKNIK Polymerase Chain Reaction (PCR)

FAHYU KARTIKA DEWI, Prof. Dr. drh. Ida Tjahajati, M.P.

2013 | Skripsi | KEDOKTERAN HEWAN

Bakteri Mycobacterium tuberculosis adalah bakteri gram positif yang menyebabkan penyakit TBC. Penyakit TBC adalah penyakit zoonosis dan penyebab kematian nomor tiga setelah penyakit kardiovaskuler. Diperlukan suatu metode diagnosa yang tepat dan cepat sehingga penanganan cepat dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi M.tuberculosis pada konsentrasi bertingkat dengan teknik PCR sehingga dapat digunakan sebagai referensi dalam deteksi penyakit TBC. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah DNA murni M.tuberculosis dari Balai Besar Penelitian Veteriner. Tahap awal yang dilakukan adalah isolasi DNA. Isolat bakteri M.tuberculosis diekstraksi, kemudian dihitung konsentrasi DNA secara kuantitatif. DNA yang diperoleh diencerkan menjadi delapan konsentrasi yang berbeda yaitu 5000pg/μl; 2500pg/μl; 1250pg/μl; 625pg/μl; 312,5pg/μl; 156,25pg/μl; 78,125pg/μl; dan 39,0625pg/μl. Tahap selanjutnya adalah amplifikasi DNA dengan menggunakan dua macam primer yaitu TPOL/TPOR spesifik untuk M.tuberculosis complex dan SP1/SP2 spesifik untuk M.tuberculosis. Tahap terakhir adalah analisis dengan elektroforesis agarose 1,5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi DNA yang lebih tinggi memperlihatkan (pita-pita) band yang lebih tebal dari pada konsentrasi DNA yang rendah. Penggunaan primer TPOL/TPOR dan SP1/SP2 sama-sama mampu mendeteksi DNA pada konsentrasi 39,0625pg/μl meskipun band yang dihasilkan sangat tipis. Teknik PCR merupakan cara yang cepat, efektif dan sensitif untuk mendeteksi M.tuberculosis dan dapat digunakan sebagai tindakan deteksi cepat penyakit TBC.

Mycobacterium tuberculosis is a gram-positive bacteri that causes tuberculosis disease. Tuberculosis is a zoonotic disease and the third cause of death after cardiovascular disease. Method and a proper diagnosis correct and quickly be required. This study aims to diagnose M.tuberculosis at levels concentration using PCR technique for reverens of tuberculosis detection. Materials used in this study is pure M.tuberculosis DNA from the Center for Veterinary Research. Initial phase is the DNA isolation. M.tuberculosis isolates were extracted, and then calculated the concentration of DNA quantitatively. DNA obtained was diluted to eight different concentrations of the 5000 pg/μl; 2500 pg/μl, 1250 pg/μl; 625 pg/μl; 312,5 pg/μl; 156,25 pg/μl; 78,125pg/μl, and 39,0625pg/μl. The next stage is the amplification of DNA by using two different primer that TPOL/TPOR specific for M.tuberculosis complex and specific for M.tuberculosis SP1/SP2. The last stage is the analysis by 1.5% agarose electrophoresis. The results showed that the higher the concentration of DNA shows band that are thicker than the lower DNA concentrations. Primary use TPOL/TPOR and SP1/SP2 equally capable of detecting DNA at concentrations 39,0625 pg/μl despite the resulting band are very thin. PCR technique is a quick, effective and sensitive for the detection of M.tuberculosis and can be used as a measure rapid detection of tuberculosis.

Kata Kunci : Mycobacterium tuberculosis, PCR, konsentrasi DNA, elektroforesis