KRIOPRESERVASI SPERMA DOMBA MENGGUNAKAN EKSTENDER TRIS YANG DIPERKAYA DENGAN KRIOPROTEKTAN LESITIN KACANG KEDELAI (Soybean lecithin) MELALUI PEMBEKUAN LAMBAT DAN VITRIFIKASI

SALMIN, Ir.,MP., Prof.Ir. Ismaya, M.Sc.,Ph.D.

2013 | Disertasi | S3 Ilmu Peternakan

Penelitian yang mempelajari kriopreservasi sperma domba menggunakan ekstender Tris yang diperkaya dengan krioprotektan lesitin kacang kedelai (Soybean lechitin) melalui pembekuan lambat dan vitrifikasi telah dilaksanakan dalam empat tahap penelitian. Penelitian 1, pengaruh pencucian sperma dan kadar lesitin kacang kedelai dalam ekstender Tris terhadap kualitas spermatozoa domba yang disimpan pada suhu 5⁰C. Semen dicuci dengan larutan Krebs- Ringer phosphate glucose dan diencerkan dengan ekstender Tris-lesitin kacang kedelai. Kombinasi perlakuan pencucian sperma dan kadar lesitin kacang kedelai tidak berinteraksi secara nyata, namun secara tunggal kadar lesitin kacang kedelai berpengaruh nyata (P≤0,05) dan perlakuan pencucian tidak berpengaruh nyata terhadap kualitas spermatozoa selama lima hari penyimpanan pada suhu 5⁰C. Penelitian 2, pengaruh kadar lesitin kacang kedelai dalam ekstender Tris terhadap kualitas spermatozoa domba yang dikriopreservasi melalui metode pembekuan lambat. Kadar lesitin kacang kedelai dalam ekstender Tris berpengaruh nyata (P≤0,05) terhadap kualitas spermatozoa domba pasca pembekuan lambat. Penelitian 3, vitrifikasi spermatozoa domba menggunakan ekstender lesitin kacang kedelai dengan kadar gliserol yang berbeda. Kadar gliserol dalam ekstender lesitin kacang kedelai berpengaruh nyata (P≤0,05) terhadap kualitas spermatozoa domba pasca vitrifikasi. Penelitian 4, uji fertilitas sperma beku domba yang dikriopreservasi menggunakan ekstender lesitin kacang kedelai. Angka fertilitas domba dari sperma beku hasil pembekuan lambat dengan 3% lesitin kacang kedelai (FL3) nyata lebih tinggi (P≤0,05) daripada hasil vitrifikasi (L3G5) dan kontrol (FL0). Kesimpulan, sperma domba yang diencerkan dengan lesitin kacang kedelai tidak perlu dilakukan pencucian untuk proses preservasi maupun kriopreservasi. Lesitin kacang kedelai terbaik diperoleh pada kadar 3% dalam ekstender Tris dengan persentase motilitas progresif, viabilitas, abnormalitas dan integritas membran spermatozoa pasca pembekuan lambat masing-masing sebesar 43,79%, 50,85%, 13,72% dan 51,65%. Penggunaan krioprotektan 3% lesitin kacang kedelai dan 5% gliserol dalam ekstender Tris sangat memungkinkan pengembangan teknologi vitrifikasi. Sperma beku domba yang dikriopreservasi dengan metode pembekuan lambat memberikan hasil inseminasi buatan yang lebih tinggi dibandingkan dengan sperma beku hasil vitrifikasi dengan angka kebuntingan (Conception rate) dan angka kelahiran (Lambing rate) masing-masing sebesar 53,85% (14/26) dan 53,85% (14/26).

The objective of this research was to study about the cryopreservation of ram semen using Tris extender enriched with soybean lecithin cryoprotectant through slow freezing and vitrification. This was carried out in four stages. In Experiment 1, the effect of semen washing and soybean lecithin level in Tris extender on the ram spermatozoa quality stored at 5°C. Semen was washed with Krebs-Ringer phosphate glucose and diluted with Tris-soybean extender. The combined treatment of semen washing and soybean lecithin levels did not perform any significant interaction; however, in single way, soybean lecithin levels provided significant effect (P≤0.05), and semen washing treatment did not provide significant effect on the sperm quality during the five days of storage at the temperature of 5°C. Experiment 2, the effect of soybean lecithin levels in Tris extender on cryopreserved ram spermatozoa quality through slow freezing method. The soybean lecithin level in a Tris extender had significant effect (P≤0.05) on post thawed-slow frozen ram sperm quality. Experiment 3, the vitrification of ram spermatozoa using soybean lecithin extender with glicerol in different levels. The glycerol level in the soybean lecithin extender provided significant effect (P≤0.05) on post thawed-vitrificated ram sperm quality. Experiment 4, The fertility test on cryopreserved frozen ram semen using soybean lecithin extender. The fertility rate of ram frozen sperm produced from slow freezing results with 3% soybean lecithin (FL3) was significantly higher (P≤0.05) than the results of vitrification (L3G5) and control (FLO). Conclussion, ram semen diluted with soybean lecithin did not need washing for both preservation and cryopreservation. Best soybean lecithin was obtained at levels of 3% in Tris extender with the percentages of progressive motility, viability, abnormality and integrity of spermatozoa membrane after slow freezing are respectively 43.79%, 50.85%, 14.88% and 51.65%. The use of the 3% soybean lecithin cryoprotectants and 5% glycerol in the Tris extender very enable the development of ram semen cryopreservation by vitrification method. Frozen ram semen cryopreserved through slow freezing method resulted in better artificial insemination than frozen semen from vitrification with conception rate and lambing rate, 53.85% (14/26) and 53.85% (14/26) respectively.

Kata Kunci : Lesitin Kacang Kedelai, Spermatozoa Domba, Pembekuan Lambat, Vitrifikasi, Angka Fertilitas.