ISOLASI MIKROBIA PENGHASIL FITASE DARI RUMEN DAN FESES SAPI DAN KARAKTERISASI FITASE YANG DIHASILKAN

SITI ZUBAIDAH, Prof. Dr. Ir. Lies Mira Yusiati, SU

2013 | Tesis | S2 Bioteknologi

Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan isolat bakteri penghasil fitase, karakterisasi bakteri meliputi pewarnaan gram, biokimia dan identifikasi isolat secara molekuler dan karakterisasi enzim fitase meliputi optimasi suhu, pH, Km dan Vmax. Cairan rumen dan feses sapi sebagai sumber isolat diambil dari sapi yang berfistula. Medium petumbuhan yang digunakan untuk isolasi adalah phytase screening medium (PSM) yang mengandung substrat Na-Fitat 0,5% dan 1,8% agar ditumbuhkan secara anaerob. Isolat bakteri yang didapat sebanyak 6 isolat yang berasal dari cairan rumen dan 22 isolat berasal dari isolasi feses sapi. Seleksi bakteri penghasil fitase menggunakan pewarnaan CoCl2 2%, ammonium molibdat dan vanadat, dan juga uji aktivitas fitase. Dari hasil seleksi tersebut diperoleh 15 isolat bakteri penghasil fitase mampu tumbuh di media anaerob kemudian dari 15 isolat tersebut ditumbuhkan ke dalam media aerob, diperoleh 14 isolat. Masing-masing isolat yang tumbuh dimedia anaerob dan aerob diukur aktivitas fitasenya. Aktivitas tertinggi pada bakteri yang tumbuh di media anaerob dan aerob dipilih sebagai isolat yang terpilih untuk pengujian lebih lanjut. Isolat terpilih yaitu isolat F1 yang berasal dari feses. Karakterisasi fitase dari isolat F1 yaitu mempunyai aktivitas optimum enzim pada suhu 45oC, aktivitas optimum enzim pada pH 7,5, dan nilai Km 14,94 uM dan V max 6,33 uM/detik. Identifikasi molekuler 16S rRNA dan biokimia bahwa isolat F1 homolog dengan Escherichia coli.

This study aims to get bacterial source of phytase, characterization of bacteria include gram stain, biochemistry and identification molecular, and characterization of phytase activity includes the optimization of temperature, pH, Km and Vmax. Bovine rumen fluid and feces as the source of isolates taken from a cow that fistulation. Phytase screening medium (PSM) used growth medium for isolation that containing Na-Phytat 0.5% as substrat and 1.8% agar that were grown anaerobically. Bacterial isolates obtained as many as six isolates derived from rumen isolation and 22 isolates from cattle feces isolation. Selection of phytase-producing bacteria using CoCl2 2% staining and ammonium molybdate and phytase activity assay. From the selection results were obtained 15 isolates of phytase-producing bacteria that can grow anaerob medium and than 15 isolates were grown in aerobic medium, obtained 14 isolates. Each of the isolates that grew in medium anaerobic and aerobic were measured of enzyme activity. The highest activity in bacteria grown in anaerobic and aerobic medium were chosen as the isolates selected for further test. F1 was selected isolate from feces. Phytase characterization of isolates F1 has the optimum temperature is 45oC, pH optimum 7.5, the value of Km is 14,94 uM and Vmax is 6,33 uM/second. Molecular identification 16S rRNA and biochemical of the isolate F1 homologous with Escherichia coli.

Kata Kunci : isolasi, seleksi, karakterisasi fitase, dan identifikasi molekuler 16S rRNA.