PROFILING SENYAWA ANTI Candida albicans YANG DIHASILKAN ISOLAT BAKTERI DARI SPONS LAUT

Pipin Kusumawati, Dr.rer.nat. Yosi Bayu Murti, M.Si., Apt.

2013 | Tesis | S2 Bioteknologi

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyeleksi bakteri yang memiliki aktivitas anti CA yang tinggi dari 10 bakteri yang diisolasi dari spons laut. Ekstrak bakteri dihasilkan dari proses fermentasi menggunakan medium basal untuk mengetahui potensi produksinya pada skala yang lebih besar. Senyawa aktif anti CA dikarakterisasi golongan senyawanya dan bakterinya diidentifikasi secara morfologi dan molekuler untuk mengetahui spesiesnya. Pengujian anti CA menggunakan metode broth microdilution dan KLTdirect bioautography. Karakterisasi senyawa aktif anti CA menggunakan metode KLT diaplikasikan dengan pereaksi semprot. Identifikasi bakteri dilakukan secara pengamatan morfologi dan pengujian molekuler menggunakan rep-PCR dan gen parsial 16S rRNA dan dilanjutkan dengan analisis BLAST. Empat dari sepuluh bakteri yang diuji merupakan bakteri potensial penghasil senyawa anti CA, yaitu BYT5C4, BYT5C5, BYT1A dan BYT7 dengan konsentrasi hambat minimum (KHM) masing-masing, yaitu 1 mg/ml terhadap CA 7,5 x 10 6 CFU/ml. Ekstrak BYT5C4 memiliki 2 senyawa aktif terpenoid. Salah satu senyawanya memiliki gugus alkaloid dan keton. Ekstrak BYT5C5 memiliki 2 senyawa aktif terpenoid. Salah satu senyawanya memiliki gugus alkaloid dan keton sementara senyawa lainnya memiliki gugus keton. Ekstrak BYT1A memiliki 4 senyawa aktif terpenoid. Salah satunya memiliki gugus alkaloid dan keton. Ekstrak BYT7 memiliki 2 senyawa aktif terpenoid dan 1 senyawa aktif keton. Uji molekuler rep-PCR menunjukkan keempatnya memiliki indeks similaritas yang rendah dan menunjukkan keempatnya merupakan spesies yang berbeda. Berdasarkan hasil identifikasi molekuler, bakteri BYT5C4 paling dekat kekerabatannya dengan Brevibacterium casei, bakteri BYT5C5 paling dekat kekerabatannya dengan Exiguobacterium profundum, bakteri BYT1A paling dekat kekerabatannya dengan Micrococcus lylae dan bakteri BYT7 paling dekat kekerabatannya dengan Bacillus firmus.

The aim of this study was to select bacteria that had high anti Candida albicans (CA) activity among 10 bacteria isolated from marine sponges. The extracts from bacteria were produced by fermentation processes using basal medium to find out the productive potential on larger scale. The active anti CA compound were characterized, and the bacteria were identified morphologically and molecularly to find out their species. Anti CA assay was conducted by microdilution broth and TLC-direct bioautography methods. The characterization of anti CA active compound using TLC method was applied with spray reagents. The identification of bacteria was done by morphological observation and by molecular test using rep-PCR and 16S rRNA, and continued with BLAST analysis. The four of ten tested bacteria were potential anti CA compound producing bacteria, which were BYT5C4, BYT5C5, BYT1A, and BYT7, with minimum inhibitory concentration (MIC) of 1 mg/ml against 7.5 x 10 6 CFU/ml. The BYT5C4 extract had 2 spots which were terpenoid which one of its compounds had aldehyde/ketone group. The BYT5C4 extract had 2 active terpenoid compounds, one of compounds had ketone group. The BYT5C5 had 2 active terpenoid compounds. One of the compounds had alkaloid and ketone group, while the other compound had ketone group. The BYT1A extract had 4 active terpenoid compounds. One of the compounds had alkaloid and ketone group. BYT7 extract had 2 active terpenoid compounds, and 1 active ketone group compound. The rep-PCR test showed the all four bacteria had low similarity index indicating that they were different species. According to molecular identification result, BYT5C4 most closely related to Brevibacterium casei, BYT5C5 most closely related to Exiguobacterium profundum, BYT1A most closely related to Micrococcus lylae, and BYT7 most closely related to Bacillus firmus.

Kata Kunci : Bakteri dari spons laut, anti CA, kadar hambat minimum, karakterisasi senyawa, rep-PCR, parsial gen 16S rRNA