ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS 2,2-DIFENIL-1 PIKRILHIDRAZIL DARI DAUN KEDONDONG (Spondias dulcis Soland. ex Park.)

RESLELY HARJANTI, Prof. Dr. Wahyono, SU., Apt

2013 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Buah kedondong (Spondias dulcis Soland. ex Park.) telah lama dikenal kaya akan antioksidan karena kandungan vitamin C dan senyawa polifenol, tetapi aktivitas antioksidan dari daunnya belum diketahui. Daun muda dikonsumsi sebagai lalapan atau dibuat sayur oleh masyarakat di beberapa daerah di Indonesia. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas antioksidan dari daun S. dulcis dengan menggunakan metode 2,2-difenil-1- pikrilhidrazil (DPPH) dan untuk mengisolasi serta mengidentifikasi senyawa aktif yang bertanggung jawab terhadap aktivitas antioksidan tersebut. Sebanyak 1500 g serbuk kering daun S. dulcis dimaserasi dengan etanol 96%, dilanjutkan dengan penguapan pelarut. Ekstrak yang dihasilkan difraksinasi dengan cara partisi cair-cair berturut-turut dengan metanol-air (9:1)-heksana, dan air-etil asetat. Fraksifraksi yang dihasilkan diuji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH secara spektrofotometri. Fraksi dengan aktivitas penangkap radikal bebas paling tinggi selanjutnya difraksinasi dengan menggunakan kromatografi cair vakum dengan pelarut yang meningkat kepolarannya yaitu: 100% n-heksana, kombinasi n-heksana-etil asetat dan etil asetat-metanol dengan berbagai perbandingan, dan 100% metanol. Setiap sub fraksi diuji secara kualitatif dengan menggunakan DPPH-autografi. Sub fraksi yang mempunyai bercak yang paling intensif diisolasi dengan menggunakan KLT preparatif. Kemurnian isolat ditentukan dengan menggunakan KLT dengan tiga sistem fase gerak yang berbeda polaritasnya. Kemudian ditentukan aktivitas penangkap radikal bebas isolat dengan metode DPPH secara spektrofotometri dengan kuersetin sebagai kontrol positif. Struktur kimia isolat ditentukan dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis, infra-merah, spektroskopi 1D dan 2D 1HNMR, 13C-NMR dan ESI-MS. Isolat menunjukkan aktivitas antioksidan yang tinggi dengan nilai IC50 10,78 mg/mL (nilai IC50 kuersetin adalah 1,71 mg/mL). Hasil analisis data spektroskopi menunjukkan bahwa struktur kimia isolat adalah rutin.

Spondias dulcis Soland ex Park fruit has already known to be rich of antioxidants due to vitamin C and polyphenolic content but less known about the antioxidant potency of the leaves. The young leaves are consumed as a culinary dish by people in some areas in Indonesia. This study was aimed to reveal the antioxidant potency of S. dulcis leaves and to isolate and to identify the active compound by using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) method as a bioassay guidance. A total of 1500 g of S. dulcis dried powder was macerated in 96% ethanol, followed by solvent evaporation. Extract yielded was fractionated by using liquid-liquid partition on methanol-water (9:1)-hexane, and water-ethyl acetate, successively. The fraction were tested for the antioxidant potency by using spectrophotometric-DPPH assay. Fraction with the highest free-radical scavenging activity was further fractionated by using vacuum liquid chromatography with gradient polarity solvent as follows: n-hexane 100%, various proportion of n-hexane-ethyl acetate and ethyl acetate-methanol, and methanol 100%. Each sub fractions were tested qualitatively by using DPPH-autography. The most intensive spot was isolated by using preparative TLC. Purity of the isolate was determined by using TLC with three different polarity eluents. The isolate was then determined its free-radical scavenging activity by spectrophotometric-DPPH assay where quercetin was used as positive control. Isolate’s chemical structure was determined by using UV-Vis spectrophotometer, infra-red, 1D and 2D 1H-NMR, 13C-NMR spectroscopes and ESI-MS. Isolate showed high antioxidant potency with IC50 value of 10.78 μg/ mL (quercetin IC50 value was 1.71 μg/ mL). Result of spectroscopy data analyses identified the isolate chemical structure as rutin.

Kata Kunci : daun S.dulcis, aktivitas penangkap radikal bebas, rutin