PENGEMBANGAN DAN VALIDASI METODE HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY UNTUK PENETAPAN KADAR ATENOLOL DENGAN DERIVATISASI 1-FLUORO-2,4-DINITROBENZEN DALAM SPIKED PLASMA

Luh Putu Mirah Kusuma Dewi, Prof.Dr.Sudibyo Martono, M.S., Apt

2013 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Atenolol atau 4-[2-hidroksi-3-[1-metil etil] amino propoksi] benzen asetamid merupakan salah satu obat golongan β-bloker yang secara luas digunakan dalam managemen terapi hipertensi, angina pektoris dan infark miokardial. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan dan memvalidasi suatu metode HPLC UV untuk menetapkan kadar atenolol dengan derivatisasi menggunakan 1-fluoro-2,4-dinitrobenzen (FDNB) dalam spiked plasma. Metode HPLC-UV yang dikembangkan didasarkan atas reaksi antara atenolol dengan FDNB dengan adanya dapar borat pH 10,5 yang menghasilkan produk yang memberikan serapan pada 249 nm. Pemisahan dilakukan menggunakan kolom Chromolith RP-18e, (100 x 4,6 mm, 2 μm), fase gerak campuran dapar asetat pH 3,5 dan asetonitril (70 : 30 v/v) dengan laju alir 1,0 mL/menit, deteksi dilakukan pada panjang gelombang 249 nm. Metode divalidasi berdasarkan parameter-parameter akurasi, presisi, linieritas, selektivitas, LOD dan LOQ. Adapun dari hasil penelitian ini diperoleh bahwa nilai LOD sebesar 1 ng/mL dengan LOQ 18,261 ng/mL. Rentang linieritas pada 100 – 800 ng/mL, 𝑟 = 0,990 dan nilai recovery 92,807 – 113,63 % (% RSD = 1,02 – 1,78%).

Atenolol, 4-[2-hydroxy-3-[(1-methylethyl)amino]propoxy]- benzeneacetamide is a cardioselective β1-adrenergic receptor blocking agent prescribed for the treatment of hypertension, angina pectoris, and cardiac arrhythmias. The present research is to develop and validate a new HPLC method with UV detection for quantitative determination of atenolol derivatized with 1- fluoro-2,4-dinitrobenzen (FDNB) in spiked human plasma. The proposed method was based on the reaction of atenolol with FDNB in borate buffer solution (pH 10,5) which formed a derivatized product with absorption at 249 nm. The product was separated by HPLC using Chromolith RP18e column (100 x 4,6 mm, 2 μm) as the stationary phase while the mobile phase consist acetat buffer solution (pH 3,5) – asetonitril (70 : 30 v/v), at flow rate 1,0 mL/min and UV detection at 249 nm. The developed method was validated by means of accuracy, precision, linearity, selectivity, LOD and LOQto fulfill the requirement for validity. The assay method was found to be linear from 100 to 800 ng/mL with limit of detection (LOD) 1 ng/mL and limit of quantitation (LOQ) 18,261 ng/mL. The recovery was 92,807 – 113,63 % (% RSD = 1,02 – 1,78%).

Kata Kunci : atenolol, HPLC, FDNB, validasi