ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA AKTIF STIMULATOR PROLIFERASI SEL LIMFOSIT DARI UMBI SARANG SEMUT (Myrmecodia tuberosa (non Jack) Bl.)

AKHMAD KHUMAIDI, Prof. Dr. Ediati Sasmito, SE., Apt

2012 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Tumbuhan sarang semut Myrmecodia tuberosa (non Jack) Bl. secara tradisional telah digunakan oleh masyarakat untuk mengobati berbagai macam penyakit seperti diare, wasir, kanker otak dan kanker rahim. Penelitian sebelumnya telah melaporkan potensi dari fraksi etil asetat sebagai peningkat proliferasi sel limfosit. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui senyawa kimia yang bertanggung jawab terhadap efek penyembuhan penyakit terkait dengan respon imun dan mengetahui korelasi kandungan flavonoid total dan fenolik total terhadap aktivitas peningkatan proliferasi sel limfosit. Pemisahan komponen kimia fraksi etil asetat dilakukan dengan cara kromatografi cair vakum (KCV) dengan sistem gradien kepolaran dimulai dari n-heksana, campuran n-heksana-etil asetat, etil asetat 100 %, campuran etil asetatmetanol serta methanol 100 %. Uji aktivitas subfraksi dilakukan dengan metode MTT terhadap sel limfosit dari mencit BALB/c secara in vitro. Kandungan flavonoid total dilakukan dengan metode kolorimetri melalui reaksi dengan AlCl3 yang dinyatakan dengan ekuivalen kuersetin dan fenolik total dengan metode Folin-Ciocalteu yang dinyatakan dengan ekuivalen asam galat. Subfraksi aktif dihidrolisis dengan HCl 2 % dengan pemanasan selama 1 jam. Hasil hidrolisis difraksinasi lebih lanjut menggunakan kromatografi lapis tipis preparatif. Fraksinasi dengan KCV menghasilkan lima subfraksi dengan total recovery sebesar 81,78 %. Hasil uji dengan metode MTT terhadap sel limfosit menunjukkan subfraksi V merupakan subfraksi teraktif. Kadar flavonoid total dan fenolik total subfraksi berkorelasi positif dengan peningkatan proliferasi sel limfosit. Aktivitas proliferasi sel limfosit dipengaruhi oleh kadar flavonoid total sebesar 60,6 % dan kadar fenolik total sebesar 16,7 %. 3. Identifikasi terhadap senyawa hasil isolasi berdasarkan data-data KLT, UV-Vis dan 1H-NMR memberikan gambaran bahwa senyawa isolat mengarah pada senyawa aglikon turunan isoflavon

Ant plant (Myrmecodia tuberosa (non Jack) Bl.) has been used traditionally to treat various diseases such as diarrhea, hemorrhoids, brain cancer, and cervical cancer. Previous research has reported the potency of ethyl acetate fraction to increase lymphocytes proliferation. The aim of this study was to determine the active chemical compound responsible for the healing effects associated with immune response and to evaluate whether the total flavonoid and total phenolic contents correlated to the activity. Separation of ethyl acetate was done by vacuum liquid chromatography (VLC) with a polarity gradient system starting from n-hexane, a mixture of n-hexane-ethyl acetate, ethyl acetate 100 %, a mixture of ethyl acetate-methanol and methanol 100 %. Subfraction effect on lymphocytes proliferation was examined on BALB/c mice lymphocytes by an in vitro technique using MTT method. Total flavonoid content was determined by using spectrophotometry with AlCl3 method and was calculated as percent quercetine equivalent (% QE). Total phenolic content was determined by Folin-Ciocalteu method and calculated as percent gallic acid equivalent (% GAE). Active subfraction was hydrolyzed by refluxing in HCl 2% for 1 hour. Afterwards the result was further fractionated using preparative thin layer chromatography. Vacuum liquid chromatography fraction yielded five subfractions with total recovery of 81.78 %. Subfraction V was the most active subfraction. Total flavonoid content contributed to lymphocyte proliferation activity by 60.6% and total phenolic by 16.7%. Active compound was identified by using TLC, UV-Vis and 1H-NMR as an aglycone of isoflavon derivate.

Kata Kunci : Myrmecodia tuberosa (non Jack) Bl., proliferasi limfosit, metode MTT