ISOLASI DAN IDENTIFIKASI ZAT ANTIBAKTERI DALAM EKSTRAK KELOPAK BUNGA ROSELA (HIBISCUS SABDARIFFA L.)

LISA SOEGIANTO, Dr. rer. nat. Triana Hertiani, M.Si., Apt

2012 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Ekstrak kelopak rosela (Hibiscus sabdariffa L.) telah diketahui memiliki efek antibakteri terhadap beberapa mikroba patogen. Diketahui bahwa mikroba dapat ditemukan dalam bentuk biofilm yang relatif lebih resisten terhadap antibiotik, penelitian untuk mengeksplorasi potensi rosela sebagai sumber antibakteri yang potensial terhadap sel bentuk planktonik dan biofilm diperlukan. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi zat aktif bentuk antibakteri ekstrak kelopak bunga rosela dengan menggunakan pertumbuhan sel planktonik dan penghambatan pembentukan biofilm Staplylococcus aureus dan Escherichia coli, serta uji penghambatan quorum sensing terhadap Pseudomonas aeruginosa sebagai bioassay guidance. Serbuk kelopak rosela dimaserasi dengan etanol 70% - HCl (99:1) v / v dan kemudian berturut-turut difraksinasi dengan n-heksana, etil asetat, n-butanol dan air. Fraksi diuji dengan menggunakan metode difusi untuk mengevaluasi efek penghambatan pertumbuhan bakteri, uji mikrodilusi untuk penghambatan biofilm dan metode difusi untuk penghambatan quorum sensing. Fraksi paling aktif difraksinasi lebih lanjut dengan menggunakan vacuum liquid chromatography dan metode kromatografi lapis tipis preparatif untuk memurnikan senyawa aktif. Bioautografi digunakan untuk mengidentifikasi bercak yang aktif di KLT. Isolat dievaluasi kemurniannya dengan menggunakan densitometri dan LCMS. Karakterisasi struktur dilakukan dengan menggunakan NMR, IR dan metode spektroskopi UV. Hasil penelitian menunjukkan fraksi etil asetat sebagai fraksi yang paling aktif dalam penghambatan pertumbuhan bakteri dengan daerah penghambatan pada S. aureus, 15,89 ± 0,37 mm (2 mg / sumuran) dan 15,93 ± 0,72 mm (4 mg / sumuran), sedangkan pada E. coli, 17 ± 0,86 mm (2 mg / sumuran) dan 17,35 ± 0,48 mm (4 mg / sumuran). Dalam uji antibiofilm, % penghambatan fraksi etil asetat terhadap pembentukan biofilm S. aureus adalah 62,05 ± 17,83%, sedangkan 11,11% ± 23,13 terdeteksi terhadap E. coli. Dalam uji penghambatan kuorum sensing, penghambatan pembentukan pyocianin terdeteksi pada P. aeruginosa sebesar 24,65 ± 1,82 mm (2 mg / sumuran) dan 26,15 ± 1,02 mm (4 mg / sumuran). Karakterisasi struktur Isolat menduga bahwa isolat merupakan derivat benzofuran.

Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) calyx extract has been known to possess antibacterial effects against several pathogenic microbes. Considering that microbes can be found in biofilm state which relatively more ressistant to antibiotics, a research to explore the potency of Rosella as a source of antibacterial which are potential against planktonic and biofilm states is needed. This study aimed to isolate and identify the antibacterial active substance form Rosella calyx extract by using planktonic growth and biofilm formation inhibition of Staplylococcus aureus and Eschericia coli, as well as quorum sensing inhibition assay towards Pseudomonas aeruginosa as bioassay guidances. Rosella calyces powder was macerated with ethanol 70% - HCl (99:1)v/v and then successively fractionated using n-hexane, ethyl acetate, n-butanol and water. Fractions were tested by using diffusion method to evaluate the effect on bacterial growth inhibition, biofilm inhibition with microdillution assay and quorum sensing inhibition by diffusion technique. The most active fraction was fractionated further by using vacuum liquid chromatography and preparative thin layer chromatography methods to purified the active compound. Bioautography was used to identify the active spot on TLC. Isolate was evaluated its purity by using densitometry and LCMS. Structure characterization was done by using NMR, IR and UV spectroscopy methods. The results showed the ethyl acetate fraction as the most active fraction in bacterial growth inhibition with the inhibition zone observed in S. aureus, 15.89 ± 0.37 mm (2 mg/well) and 15.93 ± 0.72 mm (4 mg/well), while in E. coli, 17 ± 0.86 mm (2 mg/well) and 17.35 ± 0.48 mm (4 mg/well). In the antibiofilm assay, % inhibition of ethyl acetate fraction towards S. aureus biofilm formation was 62.05% ± 17.83, while 11.11% ± 23.13 was detected against E. coli. In the quorum sensing inhibition assay, pyocianin formation inhibition was detected in P. aeruginosa as 24.65 ± 1.82 mm (2 mg/well) and 26.15 ± 1.02 mm (4 mg/well). Isolate’s structure characterization recommend that the isolate was a benzofuran derivate.

Kata Kunci : rosela kelopak, antibakteri, antibiofilm, quorum sensing inhibitor.