KHAMIR PENGHASIL INDOLE-3-ACETIC ACID DARI RHIZOSFER ANGGREK TANAH Pecteilis susannae (L.) Rafin

Titi Lasmini, Prof. Dr. Endang Sutariningsih, M.Sc.,

2012 | Tesis | S2 Biologi

Tujuan penelitian ini adalah mendapatkan khamir penghasil indole-3-acetic acid pada rhizosfer anggrek tanah Pecteilis susannae dari beberapa lokasi di Hutan Wonosadi Gunung Kidul dan menguji kemampuan isolat khamir dalam pembentukan IAA pada medium yang diberi L-triptofan sebagai prekursor. Kemampuan tumbuh anggrek P. susannae di alam memerlukan fitohormon IAA yang dapat berasal dari tumbuhan tersebut atau dari lingkungan. Beberapa jenis khamir tanah rhizosfer diduga mampu menghasilkan fitohormon IAA. Penelitian diawali dengan isolasi khamir dari tanah rhizosfer anggrek P. susannae secara langsung menggunakan medium Yeast Malt Agar (YMA). Isolat khamir yang diperoleh kemudian diseleksi melalui uji pertumbuhan pada medium Glucose Pepton Broth (GPB) yang ditambah 200 µg/ml L-tryptofan. Produksi IAA yang dihasilkan dideteksi secara kolorimetri pada spektrofotometer (OD530 nm) dengan penambahan reagen Salkowsky ke dalam supernatan kultur khamir. Kemampuan isolat khamir terpilih untuk menghasilkan IAA diuji melalui percobaan produksi IAA pada medium GPB dan medium basal (SBM) dengan dan tanpa penambahan 200 µg/ml L-triptofan. Biomasa (OD600 nm) dan produksi IAA (OD530 nm) diukur tiap 24 jam selama 4 hari. IAA yang diproduksi di dalam kultur isolat khamir terpilih kemudian diekstraksi dan diidentifikasi melalui Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan menotolkan ekstrak kultur isolat khamir pada pelat silika gel. Isolat khamir penghasil IAA terpilih kemudian dikarakterisasi dan diidentifikasi menggunakan metode standar identifikasi khamir. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 29 isolat khamir telah berhasil diisolasi dari rhizosfer anggrek tanah P. susannae (L.) Rafin secara langsung, hanya empat isolat (K2, U5, A3 dan A1) yang mampu tumbuh dan menghasilkan IAA dengan konsentrasi tinggi. Pada penambahan 200 µg/ml L-triptofan, isolat khamir terpilih (K2, U5, A3, dan A1) menghasilkan IAA dengan konsentrasi 31,191, 51,524, 56,262, dan 13,286 µg/ml berturut-turut dalam medium GPB. Produksi IAA dalam medium SBM adalah 2,789, 5,095, 2,619, dan 2,619 µg/ml berturut-turut. Identifikasi IAA pada pelat silika gel menunjukkan bahwa kultur isolat U5 dan A3 menghasilkan senyawa dengan nilai Rf sama dengan IAA standar. Keempat isolat khamir terpilih diduga merupakan strain Candida sp.1 (A1), Cryptococcus sp.1 (A3), Saccharomyces sp.1 (K2), and Saccharomyces sp.2 (U5).

The objective of this study was to obtain the yeasts capable of producing indole-3-acetic acid isolated from rhizosphere soil of terrestrial orchid Pecteilis susannae from several location in Wonosadi Forest Gunung Kidul and to investigate the capability of yeast isolates to produce IAA on medium supplemented with Ltryptophan as precursor. The capability of P. susannae orchid to grow in nature was assisted by phytohormone IAA derived from plant itself or environment. Some of rhizosphere soil yeast species estimated to be able to produce phytohormone IAA. This research commenced with the isolation of yeasts from rhizosphere soil of orchid P. susannae using Yeast Malt Agar (YMA) medium. Yeast isolates were selected based on growth experiment on Glucose Peptone Broth (GPB) supplemented with 200 µg/ml L-tryptophan. The IAA concentration was determined colorimetrically on spectrofotometer (OD530 nm) with Salkowsky’s reagent added to supernatant of yeast culture. The ability of selected yeasts to produce IAA was elucidated through IAA production experiment on Glucose Peptone Broth (GPB) and Salt Basal Medium (SBM) supplemented with and without 200 µg/ml L-tryptophan. Biomass (OD600 nm) and IAA production (OD530 nm) measured every 24 hours for 4 days. IAA produce in culture of selected yeast isolates was extracted and identified through Thin-Layer Chromatography (TLC) by spotted the culture extract on silica gel covered-plate. Selected isolates of IAA producing yeasts were identified using standard methods for yeast. The results revealed that 29 isolates of yeast had been successfully isolated from rhizosphere of terrestrial orchid P.susannae (L.) Rafin, only four isolates (K2, U5, A3 and A1) showed their capability to grow and produce high concentration of IAA on GPB and SBM. Upon addition of 200 µg/ml L-tryptophan, selected yeast isolates (K2, U5, A3 and A1) produce 31.191, 51.524, 56.262, and 13.286 µg IAA/ml respectively in PGB medium. Otherwise, IAA production in SBM medium were 2.789, 5.095, 2.619, and 2.619 respectively. The IAA identification on silica gel-plate showed that U5 and A3 isolates produce compound with the same Rf value compared to IAA standard. The fourth selected yeast isolates presumably as strain Saccharomyces sp.1 (K2), Saccharomyces sp.2 (U5), Cryptococcus sp.1 (A3), and Candida sp.1 (A1).

Kata Kunci : Indole-3-acetic acid, Khamir rhizosfer, Pecteilis susannae.