PENEGUHAN SECARA KONVENSIONAL DAN MOLEKULER ISOLAT Pseudomonas anguilliseptica SERTA PATOGENITAS PADA IKAN MAS (Cyprinus carpio)

Ajeng Aekanurmaningdyah, Prof. drh. Kurniasih, MV.Sc., Ph.D.

2012 | Tesis | S2 Sain Veteriner

Pseudomonas anguilliseptica menyebabkan Red Spot Disease (Sekitten – byo) yang mengakibatkan kematian sangat tinggi pada ikan sehingga menimbulkan kerugian ekonomi yang serius, merupakan Hama dan Penyakit Ikan Karantina golongan I. Penelitian ini bertujuan mengidentifikasi Ps. anguilliseptica secara konvensional dan molekuler serta mengetahui patogenitas berdasarkan perubahan histopatologi. Penelitian ini menggunakan 1 isolat Ps. anguilliseptica yang diidentifikasi dengan metode konvensional dan molekuler. Identifikasi konvensional secara morfologi dan biokimiawi. Identifikasi molekuler dengan mengamplifikasi fragmen 16S rRNA menggunakan primer forward Psan-F (21- mer; 5’-TTGGGAGGAAGGGCA- GTAACC-3’) dan reverse Psan-R (20-mer; 5’- TGCGCCACTAAAATCTCAAG- 3’), dilanjutkan sekuensing. Uji patogenitas digunakan 18 ekor dibagi 2 kelompok masing-masing 9 ekor. Kelompok I diinfeksi intramuskuler NaCl fisiologis sebagai kontrol dan kelompok II diinfeksi intramuskuler 0,1 ml 5,75x10 6 suspensi Ps. anguilliseptica sebagai perlakuan. Ikan dieutanasi hari ke-1, ke-8 dan ke-15 setelah infeksi. Hasil identifikasi secara konvensional yaitu secara morfologi menunjukkan koloni tampak bulat, berwarna keabu-abuan, convex, entire, diameter sekitar 1 mm dengan sel berbentuk batang dan Gram negatif. Hasil biokimiawi menunjukkan reaksi positif pada oksidase, katalase, motilitas, gelatinase, pH 5,3-9,7 dan sukrosa; serta reaksi negatif pada indol, glukosa dan laktosa. Hasil alignment dengan Gene Bank menunjukkan persamaan 94% dan variabilitas 6%. Perubahan histopatologi pada hari pertama adalah 33,3% radang otot dan 33,3% kongesti otak; hari ke-8 adanya 66,6% radang dan nekrosis otot, 33,3% nekrosis ginjal, radang dan hemoragi usus 100%, 66,6% radang epikardium, dan 66,6% kongesti otak; serta pada hari ke-15 adanya 66,6% nekrosis otot, radang epidermis; 66,6% radang dan kongesti hati, 100% peningkatan melanomakrofag pada limpa, radang dan hemoragi usus 66,6%, 100% radang dan kongesti epikardium dan 66,6% kongesti otak. Pemeriksaan secara konvensional dan sekuensing DNA pada daerah gen 16S rRNA membuktikan isolat adalah Ps. anguilliseptica. Patogenitas Ps. anguilliseptica pada Ikan Mas terlihat pada perubahan secara histopatologi sejak hari pertama setelah infeksi.

Pseudomonas anguilliseptica caused Red Spot Disease (Sekitten - Byo) resulted very high mortality in fishes and serious economic losses as a Quarantine Fish and Diseases group I. Aims this study to identify Ps. anguilliseptica with conventional and molecular and the pathogenicity changes based on histopathology. This study used an isolate of Ps. anguilliseptica were identified by conventional and molecular methods. Conventional identification of morphologically and biochemically. Molecular identification by amplification 16S rRNA fragment using forward primer Psan-F (21-mer: 5'- TTGGGAGGAAGGGCA-GTAACC-3 ') and reverse Psan-R (20-mer: 5'- TGCGCCACTAAAATCTCAAG-3'), and sequencing. Pathogenicity test used 18 fishes divided by 2 groups each group consist of 9 fishes. Group I, fishes infected intramuscularly with buffer saline as a control and group II, fishes infected intramuscularly 0.1 ml LC-50 suspension of Ps. anguilliseptica as atreatments. Fishes has been euthanasia on 1st day, 8th day and 15th day after infection. The results of conventional identification showed that the morphology of the colonies appear round, grayish, convex, entire, diameter about 1 mm with rod-shaped cells and Gram negative. Biochemical results showed a positive reaction to oxidase, catalase, motility, gelatinase, pH 5.3 to 9.7, and sucrose; and negative reactions to indole, glucose and lactose. Alignment results showed similarities with the Gene Bank 94% and 6% variability. Histopathology changed on 1st day have seen 33,3% muscle inflammation and 66,6% congestion of the brain; 8th day presence of 66,6% inflammation and muscle necrosis, 33,3% renal necrosis, 100% inflammation and intestinal hemorrhage, 66,6% inflammation of the epicardium, and 66,6% congestion of the brain; and 15th day seen 66,6% muscle necrosis and inflammation of the epidermis; 66,6% liver inflammation and congestion, 100% increased melanomakrofag the spleen, 66,6% inflammation and intestinal hemorrhage, 100% inflammation and congestion epicardium and 66,6% congestion of the brain. Examination of conventional and DNA sequencing on 16S rRNA gene region was Ps. anguilliseptica. Pathogenecity Ps. anguilliseptica in Common carp seen histopathology changed was started at 1st day post infection.

Kata Kunci : Pseudomonas anguilliseptica, Ikan Mas (Cyprinus carpio), patogenitas, molekuler