PENINGKATAN SENSITIVITAS SEL MCF DOKSORUBISIN OLEH Diajukan untuk memenuhi sebagian persyaratan mencapai MCF-7/DOX TERHADAP HESPERETIN MELALUI PENGHAMBATAN EKSPRESI P-GLIKOPROTEIN

SARMOKO, Prof. Dr. Edy Meiyanto, M.Si., Apt.

2012 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Penggunaan jangka panjang doksorubisin menyebabkan resistansi kanker karena overekspresi P-glikoprotein (Pgp), suatu protein yang berperan pada pengeluaran obat dari sel. Tujuan dari penelitian adalah mengetahui aksi hesperetin dalam meningkatkan sensitivitas sitotoksik doksorubsin pada sel kanker MCF-7 resisten doksorubisin (MCF-7/Dox) melalui penghambatan Pgp dan studi interaksi senyawa dengan IKK, EGFR, dan Pgp. Uji sitotoksik dari perlakukan tunggal dan kombinasi hesperetin dan doksorubisin dilakukan menggunakan MTT assay. Uji aktivitas penghambatan ekspresi Pgp dilakukan menggunakan imunositokimia, sedangkan studi interaksi senyawa uji dengan protein target dilakukan menggunakan molecular docking, uji apoptosis dilakukan dengan double staining akridin orange dan etidium bromida. Hesperetin mampu meningkatkan sensitivitas MCF-7/Dox. Nilai IC50 hesperetin pada sel MCF-7/Dox sebesar 267 µM sedangkan pada sel MCF-7 ori IC50 lebih dari 500 µM. Hasil kombinasi hesperetin dengan doksorubisin menunjukkan dosis optimum pada kadar konsentrasi 95 µM dan doksorubisin 230 nM. Perlakuan kombinasi hesperetin-doxorubicin pada konsentrasi tersebut dapat meningkatkan efek apoptosis yang paling besar. Perlakuan kombinasi hesperetin dan doksorubisin memperkuat penghambatan ekspresi Pgp. Efek ini dikonfirmasi dengan docking senyawa pada IKK, EGFR dan Pgp dan menunjukkan interaksi senyawa-protein dengan afinitas yang tinggi. Hasil ini menunjukkan hesperetin potensial dikembangkan sebagai agen kemosensitizer pada sel kanker payudara resisten doksorubisin.

Long-term use of doxorubicin cause cancer resistance due to overexpression of P-glycoprotein (Pgp), a protein that plays a role in drug efflux from the cell. The purpose of the study was (1) to determine the action of hesperetin in increasing the cytotoxic sensitivity of doxorubicin to the MCF-7 cancer cells resistant to doxorubicin (MCF-7/Dox) through inhibition of Pgp and (2) to study interaction hesperetin on IKK, EGFR, and Pgp by molecular docking. Cytotoxic assay of single and combination treatment of doxorubicin and hesperetin were performed using the MTT assay. Interaction between the drug with the target proteins was performed using molecular docking. Apoptosis due to drugs treatment was performed using double staining with acridine orange and ethidium bromide. While Pgp expression was observed by using immunocytochemistry. Hesperetin was able to increase the sensitivity of MCF-7/Dox. IC50 values of MCF-7/Dox cells was 267 µM, whereas in MCF-7 ori cells IC50 was more than 500 µM. Combination hesperetin with doxorubicin showed the optimum dose levels of 95 µM and 230 nM, respectively. Hesperetin and doxorubicin combination treatment at these concentration increase the effects of apoptosis. Combination hesperetin and doxorubicin sinergically supressed the Pgp expression. This effect is confirmed by docking in IKK, EGFR, and Pgp, demonstrated interactions of compound to protein with high affinity. These results suggested that hesperetin was potential to develope as a chemosensitizer agent in doxorubicin-resistant breast cancer cells.

Kata Kunci : resistensi, kanker payudara, doksorubisin, hesperetin, Pglikoprotein, IKK