ISOLASI DAN KARAKTERISASI ACTINOMYCETESASOSIASI SPONS PENGHASIL ANTIBIOTIK KOLEKSI PULAU BARRANG LOMPO MAKASSAR

HERLINA RANTE, Prof. Dr. Wahyono,SU.,Apt.

2012 | Disertasi | S3 Ilmu Farmasi

Actinomycetes merupakan jenis mikroorganisme yang sangat penting sebagai penghasil metabolit sekunder untuk pengobatan. Senyawa bioaktif dari mikroba diperoleh melalui serangkaian penapisan untuk menghasilkan suatu senyawa antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengindentifikasi bakteri actinomycetes dari spons yang berasal dari pulau Barranglompo Makassar, mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa antibakteri dari actinomycetes asosiasi spons secara spektroskopi. Isolasi Actinomycetes dari spons dilakukan dengan metode spread plate menggunakan media SNA (Starch Nitrate Agar). Identifikasi bakteri Actinomycetes berdasarkan bentuk morfologi dan fisiologi serta karakter molekuler dengan gen16S rRNA. Deteksi gen Non-Ribosom Peptida Sintetase (NRPS) dilakukan untuk mengetahui korelasinya terhadap senyawa antibakteri yang dihasilkan. Isolat actinomycetes yang paling aktif difermentasi dan diekstraksi dengan etil asetat. Pemisahan senyawa antibakteri dilakukan dengan metode kromatografi cair vakum dan KLT preparatif. Struktur senyawa aktifnya ditentukan berdasarkan data spektrum UV-Vis, IR, 1 H-NMR, 13 C-NMR, 2D NMR, dan spektrum massa. Karakterisasi secara molekuler menunjukkan bahwa isolat actinomycetes memiliki hubungan kekerabatan yang paling dekat dengan Streptomyces parvulus dan Uncultured Streptomyces sp. dengan nilai similaritas 81,68%. Hasil yang diperoleh dari karakterisasi senyawa antibakteri berdasarkan data-data yang ada menunjukkan bahwa senyawa tersebut mengarah kepada Actinomycin D atau Dactinomycin. Hal ini didukung oleh hasil sekuensing gen NRPS menunjukkan adanya kemiripan dengan S. parvulus yang diketahui menghasilkan metabolit sekunder dari kelompok senyawa peptida salah satunya Actinomycin D (Dactinomycin). Kadar hambat minimal senyawa antibakteri adalah 0,0195 µg/ml terhadap Staphylococcus aureus resisten antibiotik

Actinomycetes are very important microorganisms as bioactive secondary metabolites producers. Active substances of microba origin have been searched through a process of screening methods to obtain antibacterial compounds. The purposes of this research was to isolate and identify bacteria actinomycetes associated sponge from Barranglompo Island Makassar and to isolate, identify the antibacterial compounds from actinomycetes associated sponge by spectroscopic methode. Isolation of Actinomycetes from the sponge was done by spread plate method using SNA medium (Starch Nitrate Agar). Identification of actinomycetes bacteria was based on its morphology and physiology, and molecular characters with gen16S rRNA. Non-ribosome Peptide Sintetase (NRPS) gene detection to determined the correlation of the antibacterial compound produced. The most active actinomycetes isolates fermented and extracted with ethyl acetate. The antibacterial compound was separated using vakum liquid chromatography and preparative Thin Layer Chromatography (TLC). The structure determination was done on the basis of spectroscopy data (UV-Vis spectral data, IR, 1H-NMR, 13C- NMR, 2D NMR, and mass spectra). Molecular characterization showed that the isolates of actinomycetes closed related to Streptomyces parvulus and Uncultured Streptomyces sp. with 81.68% similarity. The results obtained from the characterization of antibacterial compounds based on existing data suggest that these compounds suspected Actinomycin D or Dactinomycin. This conclusion is supported by the NRPS gene sequencing results that show a similarity with the S. parvulus known to produce secondary metabolites of a peptide compound Actinomycin D (Dactinomycin). This compound displayed minimum inhibitory concentration 0.0195 µg / ml against Staphylococcus aureus resistant to antibiotics

Kata Kunci : actinomycetes asosiasi spons, S. aureus resisten antibiotik, dactinomycin, Streptomyces parvulus