EFEK HESPERIDIN DALAM PENINGKATAN AKTIVITAS SITOTOKSIK DOXORUBICIN PADA SEL KANKER LEHER RAHIM HeLa MELALUI MODULASI SIKLUS SEL DAN PEMACUAN APOPTOSIS

INDRI KUSHARYANTI, S.Farm, APT, Prof. Dr. Edy Meiyanto, M.Si., Apt.

2011 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Perkembangan terapi kanker sekarang ini mengarah pada kombinasi agen kemoterapi dengan agen kemopreventif. Hal ini bertujuan untuk meningkatkan efektivitas dan mengurangi resistensi serta efek samping agen kemoterapi tersebut. Hesperidin, flavonoid yang melimpah dalam citrus sp, menurunkan proliferasi banyak sel kanker. Penelitian ini bertujuan untuk menginvestigasi aktivitas sitotoksik hesperidin, doxorubicin dan kombinasi keduanya serta mekanisme modulasi daur sel dan pemacuan apoptosis pada sel HeLa. Uji sitotoksik dilakukan menggunakan MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2.5- diphenyltetrazolium bromide] assay. Profil daur sel didapat menggunakan metode flowcytometri dan dianalisis menggunakan program ModFit LT 3.0. Apoptosis pada sel HeLa dilihat menggunakan metode double staining dengan ethidium bromide-acridine orange. Hesperidin menghambat pertumbuhan sel dengan IC50 48 μM. Sedangkan perlakuan tunggal doxorubicin menghambat pertumbuhan sel dengan IC50 1 μM. Kombinasi doxorubicin-hesperidin pada sel HeLa meningkatkan efek penghambatan doxorubicin dengan penurunan viabilitas sel terendah yaitu 3,28 %, dicapai pada perlakuan kombinasi 5 μM doxorubicin dan 6 μM hesperidin. Sel HeLa menunjukkan akumulasi pada fase G1 ketika diberi perlakuan 24 µM Hesperidin sedangkan perlakuan 5 μM Doxorubicin menunjukkan fase S arrest. Perlakuan kombinasi Hesperidin 24 µM - Doxorubicin 5 μM menunjukkan akumulasi sel yang seimbang pada fase G1 and S dengan waktu inkubasi 24 jam. Hesperidin maupun doxorubicin memperlihatkan kemampuan menginduksi apoptosis. Ketika keduanya dikombinasikan terdapat peningkatan kemampuan menginduksi apoptosis. Untuk menelusuri mekanisme molekuler pemacuan apoptosis tersebut, maka dilakukan konfirmasi dengan mengukur level ekspresi protein regulator apoptosis diantaranya Bcl-2 dan Bax. Hasil uji imunositokimia menunjukkan adanya penurunan level ekspresi Bcl-2 dan peningkatan ekspresi Bax oleh hesperidin maupun doxorubicin. Kemampuan tersebut semakin meningkat ketika dikombinasikan. Berdasarkan hasil penelitian ini, hesperidin memiliki potensi besar untuk dikembangkan sebagai agen ko-kemoterapi untuk kanker leher rahim, karena terbukti dapat meningkatkan efektivitas doxorubicin terhadap sel kanker leher rahim HeLa

Combination of chemotherapeutic agent and chemopreventive agent is being a new approach in cancer treatment. This is aimed at enhancing the effectivity and also reducing drug resistance and adverse side effect of the chemotherapeutic agent. Hesperidin, a citrus flavonoid has been reported to reduce the proliferation of many cancer cells. The objectives of this study were to investigate cytotoxic activities, cell cycle modulation and apoptosis induction of hesperidin and its combination with doxorubicin on Hela cell lines. MTT [3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2.5-diphenyltetrazolium bromide] assay was used to measure the growth inhibitory effect of hesperidin and its combination with doxorubicin on Hela cells. Cell cycle profile was determined by flowcytometry and the data obtained was analyzed by using ModFit LT 3.0 program. Apoptosis assay was done using double staining method using ethidium-bromide and acridine-orange. Hesperidin inhibited cell growth with IC50 48 μM, while the IC50 of doxorubicin was 1 μM. Combination of 5 μM doxorubicin and 6 μM hesperidin showed strongest inhibitory effect toward Hela cells which save 3,28% of cell viability. Hesperidin of 24 µM accumulated HeLa cells at G1 phase, while doxorubicin of 5 μM accumulated HeLa cells at S phase. Combination of 24 μM hesperidin with 5 μM doxorubicin gave G1 and S phase accumulation at 24 h incubation. All of Hesperidin and Doxorubicin were capable of inducing apoptosis. Their combination increased apoptosis of HeLa sel compared with single treatment. In accordance of this apoptosis induction effect, imunocytochemistry method was conduct to determine the level of Bcl-2 and Bax expression. It is showed that hesperidin, doxorubicin and their combination decreases the expression Bcl-2 and increases the expression of Bax. According to this results, hesperidin has a potency to be developed as co-chemotherapeutic agent for cervical cancer.

Kata Kunci : Ko-kemoterapi, Hesperidin, Doxorubicin, Hela, Daur sel dan Apoptosis