ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ANTIOKSIDAN DARI BATANG PAKIS (ALSOPHILA GIAUCA J.SM) DENGAN METODE DPPH (2,2 - DIFENIL-1-PIKRIL HIDRAZIL)

SRI WAHDANINGSIH, S. Far., Apt, Prof. Dr. Subagus Wahyuono, M.Sc., Apt.

2011 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Stress oksidatif yang diinduksi oleh radikal telah diketahui dapat mempengaruhi terjadinya berbagai penyakit degeneratif. Adanya kekhawatiran akan kemungkinan efek samping dari antioksidan sintetik maka terjadi pergeseran penggunaan antioksidan alami. Sebagai upaya dalam pencarian senyawa antioksidan alami maka telah dilakukan penelitian isolasi dan identifikasi senyawa antioksidan dari batang pakis (Alsophila glauca J.Sm) dengan metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Penyarian batang pakis dilakukan secara maserasi dengan wasbenzen dan metanol. Ekstrak didapat dengan menguapkan pelarut wasbenzen dengan rotavapor. Setelah semua wasbenzen menguap bahan dimaserasi lagi dengan metanol. Dengan cara yang sama seperti pada wasbenzen hingga didapat ekstrak metanol. Ekstrak ini diuji aktivitas antioksidannya dengan metode DPPH secara KLT. Ekstrak yang aktif kemudian dipartisi dengan metanol 80 %. Ekstrak yang larut dan ekstrak yang tidak larut dalam metanol 80 % diuji aktivitas antioksidannya dengan metode DPPH (KLT). Ekstrak yang aktif difraksinasi dengan kromatografi cair vakum dengan menggunakan fase gerak dengan gradient kepolaran yang berbeda (wasbenzen : kloroform) dengan berbagai konsentrasi. Fraksi yang didapat diuji aktivitas antioksidannya dengan metode DPPH (KLT). Fraksi yang aktif diisolasi dengan metode KLT preparatif dan diperoleh senyawa yang kemurniannya diuji secara KLT. Isolat yang diperoleh diuji aktivitas antioksidannya dengan metode DPPH menggunakan alat spektrofotometri. Diketahui mempunyai aktivitas antioksidan penangkap radikal dengan IC50 178,4 µg/ml. Spektrum UV-Vis isolat aktif menunjukan serapan ??max 275, 340, 453, dan 483 nm, ini menunjukkan adanya senyawa aromatik. Spektrum inframerah (KBr) menampakkan serapan pada 3402,9 cm -1 (OH), 2927,9 cm - 1 (CHalifatik), 1261,7 cm -1 dan 1105,4 cm -1 (C-O), 1615,8 cm -1 (C=C aromatik), 1385,5 cm -1 (CH3). Spektra GC-MS memberikan 6 puncak. Puncak 1 dengan waktu retensi 15,503 menit menghasilkan spektrum massa dengan ion molekuler (M+) muncul pada m/z 124. Spektra ini diperkirakan senyawa 4-fluoro-1,2- xylene. Puncak 2 dengan waktu retensi 15,737 menit menghasilkan spektrum massa dengan puncak ion molekuler (M+) muncul pada m/z 206. Spektra ini diperkirakan senyawa 4-oxo-alpha-ionone. Puncak 3 dengan waktu retensi 16,126 menit menghasilkan spektrum massa dengan puncak ion molekuler (M+) muncul pada m/z 208,1. Puncak 4 dengan waktu retensi 17,165 menit menghasilkan spektrum massa dengan puncak ion molekuler (M+) muncul pada m/z 196. Spektra ini diperkirakan senyawa loliolide. Puncak 5 dengan waktu retensi 18,879 menit menghasilkan spektrum massa dengan puncak ion molekuler (M+) muncul pada m/z 178. Spektra ini diperkirakan senyawa methanone,cyclohexyl-1Himidazol- 4-yl. Puncak 6 dengan waktu retensi 23,942 menit menghasilkan spektrum massa dengan puncak ion molekuler (M+) muncul pada m/z 355.

Oxidative stress induced by the radicals have been known to affect the occurrence of various degenerative diseases. Concerns about possible side effects of synthetic antioxidants cause a shift in the use of natural antioxidants. As the search for natural antioxidant compounds had been studied the isolation and identification of antioxidant compounds in fern stems (Alsophila glauca J.Sm) using DPPH method (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl). Fern stem extraction was done by maceration with wasbenzen and metanol. Extracts was obtained by evaporating the wasbenzen solvent with a rotavapor. Material was re-macerated with methanol after all wasbenzen evaporation. The same way was done on wasbenzen to obtain the metanol extract. These extracts were tested for antioxidant activity using DPPH method with TLC. Active extract was partitioned in 80% metanol. Extracts both soluble and insoluble in metanol 80% were tested their antioxidant activity using DPPH method (TLC). Active extract was fractionated in vacuum liquid chromatography using a mobile phase with different polarity gradient and different concentrations (wasbenzen:chloroform). Antioxidant activity of fractions obtained were tested by DPPH method (TLC). Active fraction was isolated by preparative TLC method and purity of compounds obtained was tested by TLC. Antioxidant activity of isolates obtained were tested by DPPH method using spectrophotometry. Compounds known to had antioxidant activity as radical catcher with IC50 178.4 µg/ml. UV-Vis spectrum of the active isolates showed absorption ??max 275, 340, 453, dan 483 nm, indicating the existence of aromatic compounds. Infrared spectra (KBr) showed absorption at 3402.9 cm -1 (OH), 2927.9 cm -1 (CHalifatik), 1261.7 cm -1 dan 1105.4 cm -1 (C-O), 1615.8 cm -1 (C=C aromatic), 1385.5 cm -1 (CH3). GC-MS spectra gave six peaks. Peak 1 with a retention time of 15.503 minutes generated a mass spectrum with molecular ion (M+) appeared at m/z 124. These spectra were estimated 4-fluoro1,2- xylene compound. Peak 2 with a retention time of 15.737 minutes generated a mass spectrum with molecular ion peaks (M+) appeared at m/z 206. These spectra were estimated 4-oxo-alpha-ionone compound. Peak 3 with a retention time of 16.126 minutes generated a mass spectrum with molecular ion peaks (M+) appeared at m/z 208,1. Peak 4 with a retention time of 17.165 minutes generated a mass spectrum with molecular ion peaks (M+) appeared at m/z 196. These spectra were estimated loliolide compound. Peak 5 with a retention time of 18.879 minutes generated a mass spectrum with molecular ion peaks (M+) appeared at m/z 178. These spectra were estimated methanone,cyclohexyl-1H-imidazol-4-yl compound. Peak 6 with a retention time of 23.942 minutes generated a mass spectrum with molecular ion peaks (M+) appeared at m/z 355.

Kata Kunci : Batang pakis, isolasi, antioksidan, DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil)