PENINGKATAN AKTIVITAS SITOTOKSIK DOKSORUBISIN OLEH NARINGENIN PADA SEL KANKER SERVIKS HeLa MELALUI MODULASI DAUR SEL DAN PEMACUAN APOPTO

Larasati, Prof. Dr. Edy Meiyanto, M.Si., Apt.

2011 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Naringenin, suatu flavanon dalam kulit jeruk, terbukti memiliki efek sitotoksik pada beberapa macam kultur sel kanker. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sinergisme naringenin terhadap aktivitas sitotoksik doksorubisin melalui modulasi daur sel dan pemacuan apoptosis pada sel HeLa. Uji sitotoksik naringenin, doksorubisin, dan kombinasi keduanya dilakukan dengan metode MTT. Persentase viabilitas sel dan CI (combination index) digunakan sebagai parameter efektivitas kombinasi. Distribusi daur sel ditentukan dengan metode flow cytometry dan dianalisis dengan program Modfit LT 3.0. Analisis apoptosis dilakukan dengan metode pengecatan etidium bromidaakridin oranye. Ekspresi Bax dan Bcl-2 diamati dengan metode imunositokimia. Uji sitotoksisitas naringenin dan doksorubisin tunggal pada sel HeLa menghasilkan nilai IC50 berturut-turut 195 µM dan 1 µM. Perlakuan kombinasi naringenin-doksorubisin pada sel HeLa selama 24 dan 48 jam menghasilkan efek sitotoksik lebih besar daripada perlakuan tunggalnya. Berdasarkan nilai CI, kombinasi doksorubisin 0,5 µM-naringenin 25 µM memberikan efek sinergisme paling baik. Doksorubisin 0,5 µM menghambat daur sel HeLa pada fase S. Walaupun naringenin 100 µM tidak mempengaruhi daur sel HeLa, namun kombinasinya dengan doksorubisin 0,5 µM mempengaruhi penghambatan daur sel pada fase S dengan peningkatan fase sub-G1. Kombinasi naringenin 100 µM – doksorubisin 0,5 µM juga meningkatkan induksi apoptosis sel HeLa dibanding dengan perlakuan tunggalnya. Naringenin, doksorubisin, dan kombinasinya meningkatkan ekspresi Bax dan menurunkan ekspresi Bcl-2. Hasil penelitian ini menunjukkan naringenin merupakan agen kokemoterapi doksorubisin yang potensial dalam terapi kanker serviks, namun penelusuran mekanisme molekuler efek sinergisme tersebut masih pertu diteliti lebih lanjut.

Naringenin, an abundant flavanon in the peel of citrus fruits is reported to possess anti-proliferative effect in many cancer cells. Herein, we investigated the cytotoxic effect and apoptosis induction of naringenin in combination with doxorubicin on HeLa cells. The cytotoxicity assay of naringenin, doxorubicin, and their combination were carried out by using MTT method. Cell viability and combination index were used as the parameters to evaluate combination effectiveness. Cell cycle distribution was determined by flow cytometry and then analyzed by using ModFit LT 3.0 program. Apoptosis assay was done using double staining method using Ethidium Bromide-Acridine Orange. Investigation on the expression of Bax and Bcl-2 were determined by immunocytochemistry method. Naringenin and doxorubicin showed cytotoxic effect on HeLa cells with their IC50 values of 195 uM and 1 µM, respectively. Treatment of naringenin combined with doxorubicin for 24 and 48 hours showed greater cytotoxicity compared with single treatment of doxorubicin. Based on CI values, combination naringenin 25 µM and doxorubicin 0,5 µM was the best synergistic effect. Single treatment of 0,5 µM doxorubicin for 24 hours in HeLa cells induced S-phase arrest. Although 100 µM naringenin did not affect HeLa cell cycle, its combination with 0,5 µM doxorubicin induced S-phase arrest with increased percentage of sub-G1 phase. In accordance with the flow cytometry results, the apoptosis assay of combination treatment indicated increase of apoptotic cells compared than single treatment. Naringenin, doxorubicin, and their combination also increased the expression of Bax and decreased the expression of Bcl-2. These results conclude that naringenin is a potential co-chemotherapy agent for cervical cancer due to its synergism with doxorubicin.

Kata Kunci : : kokemoterapi, naringenin, doksorubisin, sel HeLa, sitotoksisitas, daur sel, apoptosis