KARAKTERISASI FRAGMEN 0,58 kb GEN PENGKODE STILBEN SINTASE (STS) DARI TANAMAN MELINJO (Gnetum gnemon L.)

ROSYIDA AZIS RIZKI, Dr. Tri Joko Raharjo, M.Si.

2011 | Tesis | S2 Ilmu Kimia

Telah dilakukan penelitian mengenai karakterisasi fragmen 0,58 kb gen pengkode stilben sintase (STS) dari tanaman melinjo (Gnetum gnemon L.). Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan urutan fragmen gen sts tanaman melinjo. Amplifikasi fragmen gen dilakukan dengan RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) yang dimulai dengan mendesain primer berdasarkan urutan conserve asam amino 10 protein stilben sintase (STS) yang terpublikasi di genebank. Hasil desain primer disintesis dan digunakan untuk amplifikasi RT-PCR dua tahap terhadap total RNA yang diisolasi dari daun melinjo. Fragmen hasil RT-PCR kemudian diisolasi dan dimurnikan untuk dilakukan sekuensing. Hasil sekuensing dianalisis dengan membandingkan urutan nukleotida gen sts yang sudah ada di genebank. Hasil desain primer adalah pasangan primer GGF2 (5’ GTTCCACCTGCGAAGCAGCC 3’) dengan GGR2 (5’ CTGGATCGCACATCCTGGTG 3’) yang diperkirakan terdapat dalam posisi 334-354 dan 897-916. Amplifikasi fragmen gen sts menghasilkan beberapa fragmen dengan salah satu fragmen berukuran 0,58 kb sesuai dengan target amplifikasi. Sekuensing fragmen hasil RT-PCR (fragmen 0,58 kb) menunjukkan kemiripan sebesar 67% dengan urutan DNA gen sts Arachis hypogaea L00952. Homologi ini lebih tinggi dibandingkan kemiripan urutan antara gen sts yang biasanya berkisar 66%. Dengan demikian fragmen yang diamplifikasi benar merupakan bagian gen sts melinjo.

A study on the characterization of 0.58 kb gene fragment encoding stilbene synthase from melinjo (Gnetum gnemon L.) has been done. The aim of this study is to obtain the sequences of sts gene fragment from melinjo. Amplification of the gene fragment by RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) was started by primers designing based of conserved sequence amino acid from 10 STS which have been published in genebank. The results of primer design was synthesized and used for RT-PCR amplification using two step technique using total RNA isolated from melinjo’s leaves as template. The results of RT-PCR fragment was then isolated, purified and sequenced. The sequences were analyzed by comparing the nucleotide sequence of existing sts genes in genebank. The designed primer was named as GGF2 (5' GTTCCACCTGCGAAGCAGCC 3') pair with GGR2 (5' CTGGATCGCACATCCTGGTG 3') which is predicted in position 334-354 and 897-916. RT-PCR amplification result in several DNA fragments with one of them has size 0.58 kb which is expected result. Nucleotide Sequence of isolated 0.58 kb fragment shows 67% insimilarity to Arachis hypogaea L00952 sts gene. This homology is higher than the average similarity among sts genes which is 66%. Thus, the amplified fragment is a part of sts gene from melinjo.

Kata Kunci : Gen stilben sintase (sts), RT-PCR, Resveratrol, Melinjo (Gnetum gnemon L.)