EKSPRESI COX-2 DI SEL GRANULOSA FOLIKEL OVARIUM AKIBAT PEMBERIAN PGV-0 DENGAN STIMULASI LH DAN DENGAN ATAU TANPA PEMBERIAN TEOFILIN (Kajian in vivo untuk Menentukan Letak Kerja PGV-0 pada Rattus norvegicus strain Sprague Dawley dalam Transduksi Sinyal Ekspresi COX-2 melalui jalur cAMP)

dr. RATNA DEWI PUSPITA, Prof. dr. Sri Kadarsih Soejono., M.Sc., Ph.D.

2011 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Dasar dan Biomedis

Latar Belakang: LH surge menginduksi ekspresi multipel gen yang produknya terlibat dalam proses ovulasi. Salah satu gen penting itu adalah COX-2. COX-2 dapat menjadi penanda molekular pada siklus ovulasi mamalia. LH beraksi pada sel ovarium melalui jalur protein kinase A (PKA). PGV-0 mempunyai aksi farmakologis dengan cara menghambat biosintesis prostaglandin melalui jalur siklooksigenase. PGV-0 menyebabkan perubahan posisi ruptur folikel di basolateral sama dengan pemberian indometasin (penghambat selektif COX-2). Tujuan: menilai penghambatan PGV-0 terhadap ekspresi COX-2 di sel granulosa folikel ovarium tikus dan menentukan letak kerja PGV-0 dalam transduksi sinyal ekspresi COX-2 melalui jalur cAMP. Metode: Penelitian dilakukan pada 27 ekor Rattus norvegicus strain Sprague Dawley betina umur 28 hari. Hewan coba disuntik PMSG 5 IU i.p. pada umur 28 hari untuk keseragaman fase estrus. Diberikan LH 5 IU i.p., teofilin 25 mg/kgBB secara oral untuk akumulasi cAMP dan PGV-0 55,2 mg/kgBB secara oral, 24 jam setelah pemberian PMSG. Akuades diberikan pada kelompok kontrol. Pada umur 30 hari tikus dikorbankan dan dibuat preparat imunohistokimia untuk mengamati ekspresi COX-2 dengan antibodi primer RB-9072-P untuk menentukan lokasi antigen. Hasil: Ekspresi COX-2 kelompok PGV-0 lebih rendah dibanding kelompok kontrol serta kelompok LH+PGV-0. Hal ini membuktikan bahwa PGV-0 mempunyai efek menghambat ekspresi COX-2 pada sel granulosa. Kelompok yang diberi LH+teofilin+PGV-0 mempunyai ekspresi COX-2 yang tidak lebih rendah dibanding kelompok LH+teofilin, tetapi lebih tinggi dibanding kelompok teofilin+PGV-0. Hal ini dimungkinkan karena penghambatan oleh PGV-0 terjadi di sesudah cAMP pada jalur cAMP dan terdapat jalur selain cAMP yang distimulasi LH. Kesimpulan: PGV-0 menghambat ekspresi COX-2 di sel granulosa folikel ovarium tikus dan letak kerja PGV-0 berada di sesudah cAMP dalam transduksi sinyal ekspresi COX-2 melalui jalur cAMP.

Background: Several genes which their products are involved in the mechanism of ovulation are induced by the LH surge. One of them is COX-2, which one of molecular marker in mammals ovulation cycle. LH acts through protein kinase A (PKA) pathway in granulosa cells. PGV-0 has farmacologic action by inhibiting prostaglandin biosynthesis in cyclooxygenase pathway. PGV-0 had action simillar with indometacin (selective COX-2 inhibitor) which cause follicle rupture in basolateral. Objectives: The objectives of this study is to investigate inhibition of PGV-0 to the expression of COX-2 in granulosa cells and to determine the action site of PGV-0 on COX-2 expression signal transduction in cAMP pathway. Methods: The subjects in this study were 27 female Rattus norvegicus strain Sprague Dawley. At the age of 28 days, subjects were induced by 5 IU PMSG. Rats were stimulated by LH 5 IU, then administered by theophylline 25 mg/kgBW orally, and PGV-0 55,2 mg/kgBW orally at 24 hours after PMSG administration. Aquades was administered as a control group. At the age of 30 days, all rats were sacrificed to make histology and immunohistology samples of the granulosa cells. Evaluation of COX-2 expression used immunohistochemistry technique with prime antibody of Rabbit Monoklonal (RB-9072-P) to determine the antigen location. Results: The PGV-0 group showed expression of COX-2 lower than the control group and LH+PGV-0 group. This supports that administration of PGV-0 decreased expression of COX-2 in granulosa cells. LH+teophylline+PGV-0 group showed expression of COX-2 not lower than LH+teophylline group, on the contrary this group showed higher expression of COX-2 than teophylline+PGV-0 group, supporting that the action site of PGV-0 is in the downstream cAMP of cAMP pathway and there were other pathways beside cAMP pathway stimulated by LH. Conclusions: The results suggest that PGV-0 inhibited expression of COX-2 in granulosa cells ovary follicle and the action site of PGV-0 is in downstream cAMP in cAMP pathway.

Kata Kunci : COX-2, PGV-0, jalur cAMP, sel granulosa