KARAKTERISASI DAN APLIKASI ANTIBODI MONOKLONAL WDSSB5 UNTUK DETEKSI VIRUS DENGUE PADA SEL C6/36 DENGAN METODE IMUNOSITOKIMIA

Nurminha, S.Pd, Dr. drh. Sitti Rahmah Umniyati, SU.

2011 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Tropis

Latar Belakang: Demam Dengue (DD) dan Demam Berdarah Dengue (DBD) disebabkan oleh virus Dengue yang terdiri dari 4 serotype Dengue 1, 2, 3 dan 4. Manifestasi klinis infeksi virus Dengue pada manusia sangat bervariasi mulai dari asimtomatik sampai berat. Isolasi virus Dengue menggunakan kultur sel C6/36 merupakan baku emas untuk menegakkan diagnosis infeksi virus Dengue. Team Dengue UGM telah berhasil memproduksi antibodi monoklonal terhadap virus Dengue-3 antara lain yang berasal dari sel hibrid DSSC7, DSSE10 dan WDSSB5. Deteksi antigen virus Dengue pada organ nyamuk Ae.aegypti dan pada sediaan apus darah manusia dengan metode imunositokimia SBPC menggunakan antibodi primer DSSC7 mempunyai sensitivitas dan spesifisitas yang tinggi, sedangkan sel hibrid WDSSB5 belum dikarakterisasi. Tujuan penelitian ini adalah untuk melakukan karakterisasi dan mengaplikasi antibodi monoklonal WDSSB5 sebagai antibodi primer untuk mendeteksi virus Dengue dari serum pasien yang positif mengandung virus Dengue yang diisolasi pada sel C6/36 dengan metode imunositokimia SBPC. Metode: Desain penelitian ini eksperimental. Pada penelitian ini propagasi sel hibridoma WDSSB5 dilakukan secara in vitro dan in vivo. Karakterisasi yang dilakukan meliputi uji klasifikasi antibodi monoklonal WDSSB5, pemeriksaan kadar protein asites WDSSB5, sensitivitas dan spesifisitas metode imunositokimia SBPC menggunakan antibodi primer WDSSB5 serta spesifitas antibodi monoklonal terhadap antigen Dengue dengan Dot blot. Virus Dengue yang berasal dari serum pasien yang positif mengandung virus Dengue diinokulasi pada sel C6/36. Deteksi antigen virus Dengue dilakukan dengan menggunakan metode imunositokimia SBPC dengan antibodi monoklonal WDSSB5 sebagai antibodi primer. Kontrol positif digunakan sel C6/36 yang diinfeksi virus Dengue 1, 2, 3, 4 dan diinokulasi pada sel C6/36, sedangkan kontrol negatif adalah sel C6/36 yang tidak diinfeksi virus Dengue. Hasil: Hasil penelitian didapatkan antibodi monoklonal WDSSB5. Antibodi monoklonal WDSSB5 termasuk klas IgG dan sub klas IgG1. Kadar antibodi monoklonal WDSSB5 terkecil yang dapat mendeteksi antigen Dengue pada sel C6/36 adalah 2,2 μg/μl. Antibodi monoklonal WDSSB5 sensitif dan spesifik mampu mendeteksi antigen Dengue 1, 2, 3, 4 pada sel C6/36 dengan metode imunositokimia SBPC. Kesimpulan: Didapatkan antibodi monoklonal WDSSB5 spesifik terhadap virus Dengue. Antibodi monoklonal WDSSB5 termasuk klas IgG dan subklas IgG1. Antibodi monoklonal WDSSB5 dapat diaplikasikan untuk mendeteksi virus Dengue yang berasal dari serum pasien yang positif mengandung virus Dengue yang diisolasi pada sel C6/36 dengan metode imunositokimia SPBC.

Background: Dengue Fever (DF) and Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) are caused by Dengue virus that consists of 4 serotypes Dengue 1, 2, 3 and 4. The clinical manifestations of Dengue infection in human have a broad spectrum ranging from asymptomatic to severe manifestations. Isolation of Dengue virus using cell culture C6/36 is considered as a gold standard for the diagnosis of Dengue virus infection. Dengue team of Gadjah Mada University successfully produced monoclonal antibodies of Dengue 3 virus originating from hybrid cell DSSC7, DSSE10 and WDSSB5. Detection of Dengue virus antigen in Ae. aegypti organ and in human blood smear with method imunocytochemical SBPC (Streptavidine Biotin Peroxide Complex) using DSSC7 primary antibody has high sensitivity and specificity, whereas WDSSB5 hybrid cell has not been characterized. The study aimed to identify characterization and application of WDSSB5 monoclonal antibody as primary antibody for detection of Dengue virus originating from serum of patiens positively carrying Dengue virus was inoculated in cell C6/36 using immunocytochemical SBPC method. Methods: The study was experimentally designed. Propagation of WDSSB5 hybridoma cell was performed in vitro and in vivo. The characterization consisted of classification test of WDSSB5 monoclonal antibody, examination of WDSSB5 acytes protein level, sensitivity and specificity of immunocytochemical SBPC method using WDSSB5 primary antibody and specificity of monoclonal antibody against Dengue antigen with Dot blot. Dengue virus originating from serum of patients positively carrying Dengue virus was inoculated in cell C6/36. Detection of Dengue virus antigen was made by using immunocytochemical SBPC method with WDSSB5 monoclonal antibody as primary antibody. Positive control was made using cell C6/36 infected with Dengue 1, 2, 3, 4 virus and inoculated in cell C6/36, whereas negative control uses cell C6/36 not infected with Dengue virus. Results: There was WDSSB5 monoclonal antibody. WDSSB5 monoclonal antibody belonged to class IgG and subclass IgG1. The least content of WDSSB5 monoclonal antibody that can detect Dengue antigen in cell C6/36 was 2.2 μg/μl. Sensitive WDSSB5 monoclonal antibody can detect Dengue 1, 2, 3, 4 virus antigen in cell C6/36 using immunocytochemical SBPC method. Conclusions: There was WDSSB5 monoclonal antibody specific of Dengue virus. WDSSB5 monoclonal antibody belonged to class IgG and subclass IgG1. WDSSB5 Monoclonal antibody can be applied to detection Dengue virus originating from serum of patients positively carrying Dengue virus was inoculated in cell C6/36 using imunositokimia SPBC method.

Kata Kunci : Dengue , Imunisitokimia SBPC, WDSSB5, Sel C6/36.