Isolasi dan identifikasi senyawa antifungal isolat mikroba gua kapur

SIMARMATA, Rumella, Dr. Ir. Ngadiman, M.Si

2010 | Tesis | S2 Bioteknologi

Eksplorasi mikroba pada situs ekologi langka (rare ecologically site) memberikan kesempatan yang menjanjikan dalam penemuan spesies mikroba baru dan senyawa baru. Candida albicans merupakan jamur patogen yang dapat menyebabkan infeksi yang berbahaya pada manusia. Sebagian besar obat antijamur dapat menghambat pertumbuhan jamur, namun masih belum cukup efektif dalam pengobatan, selain itu keberadaan dan jumlahnya masih terbatas. Penelitian ini bertujuan untuk menyeleksi isolat mikroba dari gua kapur yang mempunyai aktivitas antagonistik yang tinggi terhadap C. albicans, mengidentifikasi senyawa antijamur yang dihasilkan, dan mengkarakterisasi isolat yang terpilih. Seleksi isolat mikroba dilakukan dengan metode difusi menggunakan paper disk dan inokulasi titik. Senyawa antijamur di ekstraksi dengan pelarut organik kemudian diisolasi menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT), kromatografi kolom dan Gas Chromatography – Mass Spectrometry (GC-MS). Karakter fenotipik dan genotipik dilakukan untuk mengidentifikasi isolat yang terpilih. Di antara 76 isolat, isolat TDSE 1 menunjukkan aktivitas antagonistik tertinggi (rasio penghambatan 2,4) terhadap C. albicans. Senyawa bio-aktif teridentifikasi sebagai 1,2,4-triazol-amine 4-, E-15-heptadecenal, 3-Eikosene, 1-Dokosene, asam heksanadioat, dan asam 1,2-benzenadikarboksilat sesuai dengan analisis GC-MS. Berdasarkan karakter fenotipik dan analisis sekuen gen 16S rDNA, isolat TDSE 1 teridentifikasi sebagai Bacillus subtilis.

Exploration of microbe in habiting rare ecologically site gives a promising discovery of new species and compound. Candida albicans is a fungal pathogen that can cause dangerous infections in human. Most of the antifungal drugs are able to inhibit the fungi, but their efficacy is still not satisfied yet in addition to limited existence. This study was aimed to select microbe isolates from calcareous cave that have high antagonistic activity against C. albicans, identify the produced antifungal compound, and characterize the selected isolate. Selection was done by paper disk diffusion and point inoculation method. Antifungal compound extracted by organic solvent was then subjected to Thin Layer Chromatography (TLC), column chromatography and Gas Chromatography - Mass Spectrometry (GC-MS) analysis. Phenotypic and genotypic characters were determined to identify the selected isolate. Among 76 isolates, isolate TDSE 1 showed the highest antagonistic activity (inhibition ratio 2.4) against C. albicans. TLC analysis of n-hexana extract determined bio-active compound as phenolic group. The bio-active compounds contain a mixture of 1,2,4-triazol-4-amine, E-15-heptadecenal, 3-Eicosene, 1-Docosene, Hexanedioic acid, and 1,2-Benzenedicarboxylic acid according to GC-MS analysis. Based on phenotypic characters and 16S rDNA sequence, isolate TDSE 1 was identified as Bacillus subtilis.

Kata Kunci : Gua kapur,C albicans,Antifungal,Bacillus subtilis