Kandidat probe gen surface antigen 1 (SAG 1) terlabel digoxigenin (DIG) untuk deteksi toxoplasma gondii

SEPTIANA, Nafratilova, Dr. drh. Asmarani Kusumawati, M.P

2010 | Tesis | S2 Bioteknologi

Toxoplasma gondii merupakan patogen oportunistik yang menyebabkan toksoplasmosis. Infeksi T. gondii dapat menimbulkan kerugian yang cukup besar pada manusia dan hewan. Manifestasi klinis akibat infeksi parasit ini yaitu dapat mengakibatkan abortus, hidrochepalus, kalsifikasi otak, retinokorioditis, penuruan produksi bahkan kematian. Teknik diagnosa dini yang cepat dan tepat untuk toksoplasmosis diperlukan karena tingkat prevalensinya yang tinggi. Tujuan penelitian ini adalah membuat probe yang berasal dari sekuen gen Surface Antigen 1 (SAG1) untuk mendeteksi Toxoplasma gondii dan menguji spesifitas serta sensitifitas probe sebagai alat diagnosis toksoplasmosis. Penelitian ini menggunakan gen SAG1 T. gondii isolat lokal IS-1, yang selanjutnya diklon pada pGEX-2T dan diekspresikan dalam E. Coli DH5α. Probe gen SAG1 (probe TS) disintesis dengan PCR Dig Labeling Mix menggunakan forward dan reverse primer spesifik menghasilkan probe terlabel digoxigenin sepanjang 213 base pair (bp). Hasil analisis BLAST menunjukkan bahwa desain kandidat probe TS memiliki spesifitas yang tinggi terhadap berbagai strain T. gondii. Deteksi T. gondii dilakukan dengan hibridisasi dot-blot. Probe mampu mendeteksi DNA T. gondii dalam plasmid rekombinan pGEX-SAG hingga konsentrasi 100 pg dan dalam DNA takizoit hingga konsentrasi 10 ng.

Toxoplasma gondii is one of the opportunistic pathogen that causes toxoplasmosis. Infection of Toxoplasma gondii has been estimated to be as high in human and animal. The manifestation of infection were abortion, hydrocephalus, brain calcification, chorioretinal scar, loss productivites to death in patients with acquired immunosuppression. Early methode diagnostic that rapid and accurate is essential for T. gondii because that have high prevelence. The purpose of this study was to develop a sensitive probes derived from Surface Antigen 1 (SAG1) for detection T. gondii and to examine specificity and sensitivity probes as diagnostic tool for toxoplasmosis. This research used SAG1 gene T. gondii isolate local IS-1 was cloned into pGEX-2T and transformed into Eschericia coli DH5α. The sequence SAG1 was labeled with digoxigenin (non radioactive labeled) using PCR Dig Labeling Mix to derived 213 bp (probe-TS). BLAST and dot-blot hybridization analyses showed that probes had high specifity with other strains of T. gondii. Probes were able to detect T. gondii up to 100 pg of recombinant plasmid pGEX-SAG and up to 10 ng of tachyzoites DNA.

Kata Kunci : Probe, SAG 1, Toxoplasma gondii, Hibridisasi dot-blot