Deteksi molekuler perkinsus sp pada kerang darah (Anadara granosa) di Pantai Utara Jawa

WALIDI, Wawing, Dr. drh. R. Wisnu Nurcahyo

2010 | Tesis | S2 Sain Veteriner

Perkinsus sp. adalah parasit protozoa yang telah menginfeksi lebih dari 60 spesies moluska dan menjadi penyebab kematian masal pada oyster. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui keberadaan Perkinsus sp pada kerang Darah (Anadara granosa) di perairan pantai Utara Jawa yang meliputi Cirebon, Semarang dan Surabaya. Sampel Kerang Darah (Anadara granosa), masingmasing sebanyak 20 ekor diambil dari perairan pantai Cirebon, pantai Semarang dan pantai Surabaya. Sampel organ dari kerang Darah dilakukan pemeriksaan dengan uji PCR (Polymerase Chain Reaction) dengan cara mengambil sampel jaringan sebanyak 50 mg dipotong dari insang, mantel dan kaki dari kerang Darah, kemudian difiksasi dengan etanol absolut. Primer untuk Perkinsus adalah PerkITS-85 forward 5’ CCG CTT TGT TTG GAT CCC 3’ dan PerkITS-750 reverse 5’ ACA TCA GGC CTT CTA ATG ATG 3’ ekstraksi dan amplifikasi menggunakan Kit Promega. Uji konfirmasi Histopatologi dilakukan untuk melengkapi data hasil uji PCR dengan mengambil 10 sampel bernomor genap dari tiap lokasi dengan potongan jaringan yang mencakup insang, mantel dan kaki. Organ di fiksasi dengan larutan formalin 10%, dan diwarnai Hematoxylin & Eosin. Hasil PCR menunjukkan keberadaan Perkinsus sp pada kerang Darah di perairan Pantai Utara Jawa meliputi Cirebon, Semarang dan Surabaya pada 703 bp. Persentase keberadaan Perkinsus sp pada kerang Darah di Cirebon, Semarang dan Surabaya pada jaringan insang 70%, 60%, 55% mantel 60%, 50%, 40% kaki 50%, 50%, 35%. Hasil positip pada pemeriksaan PCR tidak selalu ditemukan adanya kista pada organ kerang darah pada pemeriksaan histopatologi, kista Perkinsus sp banyak ditemukan di jaringan kaki.

Perkinsus sp. is a protozoan parasite have infected more than 60 species of molluscs and caused a high mortality of oysters. The aim of study was to determine the presence of Perkinsus sp on Blood Cockle (Anadara granosa) on the North Coast of Java, including Cirebon, Semarang and Surabaya. Twenty Blood Cockle were collected each from the coastal waters of Cirebon, Semarang and Surabaya. Samples were examined by PCR (Polymerase Chain Reaction) test. Sample of fifty miligram tissue were cut from gills, mantle and foot, then fixed in the absolute ethanol. Primer of Perkinsus is PerkITS-85 forward 5 'CCG GAT TTG CTT TGT CCC 3' and PerkITS-750 reverse 5 'ACA TCA CTT GGC CTA ATG ATG 3'. The extraction and amplification reagent used Promega Kit. Histopathological examination was carried out to compare the PCR test by taking the 10 samples (neven-numbered at same samples) from each location. Samples were fixed in a 10% formalin solution, and stained with Hematoxylin & Eosin. Results of PCR showed the presence of Perkinsus sp on Blood Cockle from Cirebon, Semarang and Surabaya on the 703 bp. The presence of Perkinsus sp in Blood Cockle was from Cirebon, Semarang and Surabaya on the gill tissue 70%, 60%, 55% mantle 60%, 50%, 40% foot 50%, 50%, 35%. The cysts containing Perkinsus sp were not always found in the organs of Blood Cockle which had a positive PCR results. The cysts were mostly found in the foot tissue.

Kata Kunci : Polymerase chain reaction,Anadara granosa,Perkinsus sp