Peningkatan efek sitotoksikdoxorubicin oleh hesperidin pada sel kanker payudara T47D melalui pemacuan apoptosis dan modulasi daur sel

SETIAWATI, Agustina, Dr. Ratna Asmah Susidarti, M.Si., Apt

2010 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Kemoterapi kanker payudara menggunakan doxorubicin menimbulkan masalah resistensi dan efek samping seperti kardiotoksisitas dan hepatotoksisitas. Strategi yang digunakan untuk mengatasi masalah tersebut adalah ko-kemoterapi, yaitu mengkombinasikan obat kemoterapi dengan agen kemopreventif. Agen kemopreventif yang telah diteliti telah mempunyai efek sitotoksik adalah hesperidin. Hesperidin menghambat proliferasi sel kanker hepar (Hep-G2), sel kanker kolon (SNU-C4, HCT-116), sel kanker payudara (MDA-MB-231, MCF-7, MCF-7-GFP-α-tubulin) dan neuroblastoma (SK-N-M). Penelitian mengenai hesperidin dan kombinasinya dengan doxorubicin terhadap sel kanker payudara T47D belum pernah dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui mekanisme molekuler efek kombinasi hesperidin dan agen kemoterapi doxorubicin terhadap pemacuan apoptosis dan penghambatan daur sel. Efek sitotoksik hesperidin dan kombinasinya dengan doxorubicin diuji dengan metode MTT. Pengamatan pemacuan apoptosis menggunakan metode double staining dengan akridin oranye-etidium bromide. Distribusi sel pada fasefase dalam daur sel dilakukan dengan flowcytometry dan dianalisis lebih lanjut dengan metode Modfit LT.3.0. Ekspresi p53, CDK4 dan cdc2 diamati menggunakan metode imunositokimia. Hesperidin hingga konsentrasi 200 μM menunjukkan efek sitotoksik yang lemah sedangkan doxorubicin menunjukkan efek sitotoksik kuat dengan IC50 15 nM. Kombinasi hesperidin 100 μM-doxorubicin 7.5 nM mempunyai efek sitotoksik paling kuat diikuti oleh hesperidin 50 μM-doxorubicin 7.5 nM sedangkan hesperidin 5 μM-doxorubicin 7.5 nM tidak memberikan efek sitotoksik secara signifikan. Hesperidin 100 μM tidak menunjukkan pemacuan apotosis kuat sedangkan kombinasinya dengan doxorubicin 7.5 nM pemacuan apoptosis kuat. Perlakuan tunggal hesperidin 100 μM dan doxorubicin 7.5 nM serta kombinasinya menyebabkan akumulasi sel T47D pada fase G2. Penghambatan daur sel pada fase G2 kemungkinan diperantarai oleh penekanan ekspresi cdc2, sedangkan ekspresi p53 dan CDK4 tidak berpengaruh. Hesperidin potensial untuk dikembangkan sebagai agen ko-kemoterapi pada kanker payudara. Mekanisme molekuler hesperidin sebagai agen ko-kemoterapi perlu diteliti lebih lanjut.

Breast cancer chemotherapy using doxorubicin give drug resistance and side effect problems, such as cardiotoxicity dan hepatotoxicity. Co-chemotherapy, which combines chemotherapy and chemopreventive agent, proposes to solve those problems. Chemopreventive agent that was proven has cytotoxic effect is hesperidin. Hesperidin has cytotoxic effect on liver cancer cells (Hep-G2), colon cancer cells (SNU-C4, HCT-116), breast cancer cells (MDA-MB-231, MCF-7, MCF-7-GFP-α-tubulin) and neuroblastoma (SK-N-M). Study of hesperidin and its combination with doxorubicin on T47D breast cancer cells has never done yet. This study is focused on molecular mechanism of cytotoxic effect of hesperidindoxorubicin combination on apoptosis induction and cell cycle modulation. Cytotoxic effect of hesperidin and its combination with doxorubicin was assayed by MTT method. Apoptosis induction assay was done by double staining method with orange acridin and ethidium bromide. The cell distribution in cell cycle was observed by flowcytometry, further analyzed by Modfit LT 3.0. p53, CDK4 and cdc2 expression is analyzed by immunocytochemistry. 200 μM and lower concentration of hesperidin showed weak cytotoxic effect while doxorubicin showed strong cytotoxic effect with IC50 15 nM. Combination of 100 μM hesperidin -7.5 nM doxorubicin had stronger cytotoxic effect than 50 μM hesperidin -7.5 nM doxorubicin, while 5 μM hesperidin -7.5 nM doxorubicin didn’t have significant cytotoxic effect. 100 μM hesperidin didn’t show strong apoptosis induction, in the other hand its combination with 7.5 nM doxorubicin showed strong apoptosis induction. Single treatment of 100 μM hesperidin, 7.5 nM doxorubicin and their combination showed T47D accumulation on G2 of cell cycle. G2 arrest might be affected by suppression of cdc2 expression while p53 and CDK4 expression didn’t involve. Hesperidin is a potential co-chemotherapy agent on breast cancer. Molecular mechanisms of hesperidin as a co-chemotherapy need to be explored.

Kata Kunci : Hesperidin,Doxorubicin,Ko,kemoterapi,T47D,Apoptosis,Daur sel, hesperidin, doxorubicin, co-chemoptherapy, T47D, apoptosis, cell cycle