Aktivitas sitotoksik senyawa turunan benzil-1, 10-fenantrolin pada cell line raji dan pengaruhnya pada apoptosis

AMRI, Fahrul, Prof. DR. Mustofa, Apt., M.Kes

2009 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Dasar dan Biomedis

Senyawa benzil-1,10-fenantrolin dikenal sebagai penghambat metaloprotease yaitu suatu enzim yang dibutuhkan untuk pembelahan sel. Saat ini telah berhasil disintesis senyawa (1)-N-(4-etoksibenzil)-1,10-fenantrolinium klorida (EBF-Cl), (1)-N-(4butoksibenzil)-1,10-fenantrolinium bromida (BBF-Br), (1)-N-(4-benziloksi-3metoksibenzil)-1,10-fenantrolinium klorida (BMBF-Cl). Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji aktivitas sitotoksik ketiga senyawa turunan benzil-1,0-fenantrolin tersebut pada cell line Raji, mengkaji toksisitas in vitro pada cell line Vero (sel normal), dan mengkaji pengaruhnya terhadap proses apoptosis cell line Raji. Penelitian dilakukan pada kultur cell line Raji dengan senyawa EBF-Cl, BMBF-Cl, BBF-Br sebagai bahan uji serta doksorubisin sebagai kontrol positif. Pengamatan aktivitas sitotoksik dilakukan dengan metode MTT assay setelah masa inkubasi 24 jam. Konsentrasi terbaik yang digunakan berkisar antara 0,16 dan 2,50 µg/mL. Uji sitotoksik ketiga senyawa uji pada cell line Vero dilakukan dengan menggunakan metode yang sama pada konsentrasi berkisar antara 0,16 µg/mL dan 10,00 µg/mL. Senyawa (1)-N-(4-etoksibenzil)-1,10-fenantrolinium klorida (EBF-Cl), (1)-N-(4benziloksi-3-metoksibenzil)-1,10-fenantrolinium klorida (BMBF-Cl), (1)-N-(4butoksibenzil)-1,10-fenantrolinium bromida (BBF-Br) bersifat sitotoksik terhadap cell line Raji dengan IC50 berturut-turut sebesar 0,28±0,09 µg/mL, 0,49±0,28 µg/mL, dan 0,39±0,33 µg/mL. Tingkat selektivitas yang tinggi terhadap sel kanker dibuktikan dengan penghitungan Indeks Sitotoksik berturut-turut sebesar 30,63±3,79, 41,404±18,99, dan 15,76±13,01. Pada uji apoptosis, senyawa EBF-Cl, BMBF-Cl, dan BBF-Br tidak memacu apoptosis terhadap cell line Raji, sehingga dimungkinkan ketiga senyawa uji menimbulkan aktivitas sitotoksik terhadap cell line Raji melalui mekanisme lain. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa senyawa EBF-Cl, BMBF-Cl, dan BBF-Br menimbulkan aktivitas sitotoksik terhadap cell line Raji dengan tingkat selektivitas yang tinggi melalui mekanisme selain apoptosis.

Benzyl-1,10-phenanthroline is known as metaloprotease inhibitor, an enzyme that required for cell cycle. Nowadays, researchers have sucessfully sinthesized (1)-N-(4ethoxybenzyl)-1,10-phenanthrolinium cloride (EBF-Cl), (1)-N-(4-buthoxybenzyl)-1,10phenanthrolinium bromide (BBF-Br), (1)-N-(4-benzyloxy-3-metoxybenzyl)-1,10phenanthrolinium cloride (BMBF-Cl). The purpose of this study are to evaluate cytotoxic activity of benzyl-1,10-phenanthroline derivatives on Raji cell line, to evaluate in vitro toxicity on Vero cell line (normal cell), and to evaluate their effects on apoptotic process. The study was done on Raji cell line culture with EBF-Cl, BMBF-Cl, and BBF-Br as the compound and doxorubicin as the positive control. Cytotoxicity assay were conducted on Raji cell line using MTT assay procedure after 24 hours incubation. The best concentration used is between 0,16 and 2,50 µg/mL. Cytotoxicity assay on Vero cell line is conducted using the same procedure on concentration between 0,16 µg/mL and 10,00 µg/mL. EBF-Cl, BMBF-Cl, and BBF-Br have cytotoxic activity on Raji cell line with IC50 0,28±0,09 µg/mL, 0,49±0,28 µg/mL, and 0,39±0,33 µg/mL, respectively. Selectivity on cancer cell is proven by calculating the cytotoxicity index. The cytotoxicity index of the three compounds are 30,63±3,79, 41,40±18,99, and 15,76±13,01 respectively. While for apoptotic assay, EBF-Cl, BMBF-Cl, and BBF-Br did not cause apoptotic process on Raji cell line. Because of that, the three compounds might have cytotoxic activity on Raji cell line by other mechanism. In conclusion, EBF-Cl, BMBF-Cl, and BBF-Br showed cytotoxic activity on Raji cell line with high selectivity on cancer cell through other mechanism.

Kata Kunci : Benzil,1,10,fenantrolin,Sitotoksik,Apoptosis,Cell line raji,Cell line vero, benzyl-1,10-phenanthroline - cytotoxic - apoptotic - Raji cell line - Vero cell line