Isolasi dan identifikasi senyawa berpotensi anti angioenesis akar pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack) menggunakan pembanding Eurikumanon

SALAMAH, Nina, Prof. Dr. Sugiyanto, SU, Apt

2009 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Pasak bumi is one of the Indonesian original plants having anti cancer activity. One compound of akar pasak bumi, i.e eurycomanone was proved to have cytotoxic effect on cancer cell culture by inducs apoptosis on HeLa cells. Recently study of the anti angiogenic mechanism activity for compounds of akar pasak bumi is not available yet. Therefore, this study was aimed to isolate and identify compounds of akar pasak bumi using euycomanone as a marker and to look at the anti angiogenic activity of the compounds on corio alantois membrane (CAM) of chicken embryo induced by bFGF. The akar pasak bumi was ground and was macerated with methanol. The macerate was fractioned by mean of VLC. Six fraction was obtained. The second fraction exhibited two spots on a TLC system, one spot was chromatographed with eurycomanone as the reference standart and another spot exhibited blue fluorecence at 254 nm. This secong fraction, then, was chromatographed on a preparative scale TLC to separate isolate A and B respectively. Anti angiogenic test was performed for methanol extract at concentration series 20, 40, 60, 80, 100 μg/ml. Anti angiogenic test was performed for Isolate A and B at concentration series of 5, 10, 15, 20, 40 μg/ml respectively. Egg embrio (8-9 days) were divided into 8 groups. The first group was implanted paper disc only, the second group were given bFGF on Tris HCl buffer and the third group were given bFGF (on Tris HCl buffer) + 0,8 % DMSO. The fourth to eighth group were induced by 10 ng bFGF and the test preparation on the respective concentration. After incubation at 390C for 3 days, each egg was opened, the content of each was aspired and discended, the CAM sticked to its shell was examined macroscopically and microscopically for new blood vessel formation. Methanol extract inhibited angiogenesis at concentration of 40 μg/ml. Isolate A inhibited angiogenesis at concentration of 10 μg/ml and isolate B 15 μg/ml. The anti angiogenic activity of isolate A was higher than that of isolate B. Based on spectral data of UV, IR, 1H NMR, 13C NMR and MS of isolate A and comparison with the isolate A was eurycomanone.

Pasak bumi (Eurycoma longifolia, Jack) adalah salah satu tanaman asli Indonesia yang memiliki potensi anti kanker. Salah satu kandungan akar pasak bumi, yaitu eurikumanon telah terbukti bersifat sitotoksik pada kultur sel kanker A-549, MCF-7, fibrosarcoma, melanoma, kanker kolon dan dapat menginduksi apoptosis pada Sel HeLa. Sampai saat ini belum ada penelitian dengan pendekatan mekanisme anti angiogenesis yang dilakukan pada senyawa hasil isolasi akar pasak bumi. Angiogenesis merupakan peristiwa pertumbuhan pembuluh darah baru, yang memungkinkan sel kanker mendapatkan suplai nutrisi dan oksigen, sehingga dapat terus bertahan hidup. Oleh karena itu, melalui penelitian ini akan dilakukan isolasi dan identifikasi senyawa dari akar pasak bumi menggunakan pembanding eurikumanon serta uji efek anti angiogenesis pada membran korio alantois (CAM) embrio ayam yang terinduksi bFGF. Serbuk akar pasak bumi dimaserasi dengan metanol kemudian difraksinasi menggunakan Vacuum Liquid Chromatography (VLC) diperoleh 6 fraksi. Profil KLT fraksi ke 2 mengandung bercak pada Rf yang sama dengan bercak eurikumanon dan satu bercak lain yang berfluoresensi biru di bawah UV 254 nm. Fraksi ke 2 diisolasi menggunakan KLT preparatif, dihasilkan isolat A dan B. Uji anti angiogenesis dilakukan terhadap ekstrak methanol dengan dosis berturut-turut 20, 40, 60, 80 dan 100 μg/ml serta isolat A dan B masing-masing dengan dosis 5, 10, 15, 20, 40 μg/ml. Uji anti angiogenesis dilakukan dengan membagi telur berembrio umur 8-9 hari dalam delapan kelompok perlakuan. Kelompok I sebagai kontrol paper disc, kelompok II sebagai kontrol bFGF, kelompok III sebagai kontrol bFGF+ pelarut DMSO 0,8%, kelompok IV, V, VI, VII dan VIII sebagai kelompok uji penghambatan angiogenesis, diberi bFGF 10 ng dan larutan uji. Setelah diinkubasi selama 3 hari (umur embrio 12 hari), telur dibuka dan isi telur dikeluarkan, kemudian membran korio alantois yang melekat pada cangkang diamati secara makroskopik dan mikroskopik, dihitung jumlah pembuluh darah yang terbentuk dan dibandingkan dengan kelompok III. Ekstrak metanol menghambat angiogenesis dengan kadar 40 μg/ml, isolat A 10 μg/ml dan isolat B 15 μg/ml. Potensi anti angiogenesis isolat A cenderung lebih besar dari isolat B. Identifikasi struktur berdasarkan data spektra UV, IR, 1H NMR, 13C NMR dan MS menunjukkan bahwa isolat A merupakan senyawa eurikumanon.

Kata Kunci : Anti angiogenesis,Eurywma longifulia,eurikumanon