Validasi metode kromatografi cair kinerja tinggi isokratik untuk penetapan kadar asam galat, kafein, dan epigalokatekin galat pada berbagai produk teh celup

MARTONO, Yohanes, Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt

2009 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) yang cepat dan akurat untuk penetapan kadar asam galat, kafein, dan epigalokatekin galat (EGCG) dengan sistem elusi fase gerak secara isokratik telah dikembangkan. Sistem KCKT terdiri atas kolom fase terbalik C18 (Eurosphere C18, 250 × 4,6 mm, 5μm), fase gerak campuran asam orto-fosfat 0,1% : air : asetonitril : metanol (14 : 7 : 3 : 1 v/v/v/v) pH = 4,00 dengan kecepatan alir 1,2 mL/min serta dideteksi dengan detektor UV pada panjang gelombang 280 nm. Validasi dari metode ini dikonfirmasi dari selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, batas deteksi dan batas kuantitasi. Metode yang dikembangkan dapat memenuhi syarat-syarat validasi metode dan telah digunakan untuk menganalisa berbagai produk teh celup (teh hijau dan hitam). Pada teh hijau, hasilnya menunjukkan bahwa kandungan terbesar adalah EGCG diikuti kafein dan asam galat sedangkan pada teh hitam, EGCG tidak terkuantitasi.

A rapid and accurate High Performance Liquid Chromatography (HPLC) method for determination of gallic acid, caffein, and epigallocatechin gallate (EGCG) with an isocratic mobile phase elution was developed. HPLC parameters consisted of a C18 reverse phase column (Eurosphere C18, 250 × 4.6 mm, 5μm), mobile phase composed of 0.1% ortho phosporic acid : water : acetonitrile : methanol (14 : 7 : 3 : 1 v/v/v/v) pH = 4.00, flow rate 1.2 mL/min and was detected by UV detector at 280 nm. The validation of this method was confirmed from selectivity, linearity, accuracy, precision, limit of detection and limit of quantitation. The method developed has proved to comply to validation requirements and has been applied to analyze various tea bag products (green and black tea). In green tea, the results showed that the highest amount of constituent was EGCG followed by caffein and gallic acid, whereas in black tea, EGCG can not be measured.

Kata Kunci : Validasi metode,KCKT,Asam galat,Kefein,Validation method,HPLC,gallic acid,caffein,epigallocatechin gallate,tea bag