Efek ekstrak etanolik rumput mutiara (Hedyotis corymbosa L.) terhadap aktivitas sitotoksik doxorubicin pada sel kanker kolon WiDr

SUPARMAN, Dr. Edy Meiyanto, M.Si., Apt

2008 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Pengembangan terapi kanker dewasa ini diarahkan pada kombinasi obatobat sitotoksik dengan agen kemopreventif. Agen kemopreventif dari bahan alam diharapkan dapat meningkatkan efikasi sekaligus menurunkan toksisitas obat sitotoksik. Herba Hedyotis corymbosa L mengandung beberapa senyawa sitotoksik diantaranya adalah asam ursolat. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksik H. corymbosa dan kombinasinya dengan doxorubicin pada sel kanker kolon, WiDr. Keberadaan asam ursolat dalam herba H. corymbosa diidentifikasi dengan kromatografi lapis tipis pada lempeng silika menggunakan eluen kloroform:metanol (9:1); penampak bercak asam sulfat 10% dalam etanol. Uji sitotoksik perlakuan tunggal dan kombinasi dilakukan menggunakan metode MTT. Potensi sitotoksik ditentukan dengan harga IC50, potensi kombinasi ditentukan dengan harga Combination Index (CI). Uji induksi apoptosis dilihat melalui pengecatan dengan etidium bromida-akridin oranye. Analisis daur sel dilakukan dengan metode flowcytometry. Dari hasil KLT didapat bercak yang memiliki warna dan harga Rf yang sama dengan standar asam ursolat (merah muda, Rf = 0,68). Pada uji efek sitotoksik asam ursolat, ekstrak etanolik H. corymbosa dan doxorubicin didapatkan harga IC50 berturut-turut 15 μg/ml, 116 μg/ml, dan 795 nM. Pada uji kombinasi doxorubicin (DOX) - ekstrak etanolik H. corymbosa (EEH) memberikan efek sinergis pada kombinasi DOX-EEH, 100ng/ml-10μ/ml; 260ng/ml-10μg/ml: 200ng/ml-10μg/ml; 100ng/ml-30μg/ml. Pada uji penghambatan ekspresi COX-2 secara imunositokimia EEH, doxorubicin dan kombinasi keduanya menghambat ekspresi COX-2 pada sel WiDr. EEH menghambat fase G1 pada daur sel WiDr, sedangkan doxorubicin menghambat pada fase G2/M pada daur sel WiDr. Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa kombinasi EEH dengan doxorubicin memberikan efek sinergis. Dan menginduksi apoptosis dengan cara menghambat ekspresi COX-2, dengan mengahambat fase G2/M pada daur sel WiDr.

The therapy of Cancer recently extended at combination of cytotoxic drugs with chemopreventive agents. Rumput mutiara (Hedyotis corymbosa L) is one of the plants that has been used for traditional medicine to cure cancer with ursolic acid as the main compound. The aim of this research is to examine the effect of rumput mutiara herb ethanolic extract (EEH) in combination with doxorubicin against WiDr cancer cell lines. Identification of ursolic acid was done with TLC at silica plate developed by mixture of chloroform : methanol (9:1); observed in visible light after spraying with sulfuric acid 10% in ethanol. The cytotoxic assay at single treatment and its combination were done using MTT method. Cytotoxic potency has been determined by IC50 value, combination potency determined by Combination Index (CI) value. Apoptosis induction was done by acrydine orange-etidium bromide staining. The COX-2 protein expression was examined with imunocytochemistry assay. Cell cycle analiyze was done using flowcytometry method and then analyzed with cell quest program. EEH had similar spot with ursolic acid standard Rf: 0, 68 on TLC. Single application of ursolic acid, EEH and doxorubicin inhibit against growth of WiDr cell lines with IC50 15 μg/ml, 116 μg/ml and 795 nM successively. Combination doxorubicin with EEH (DOX-EEH) showed synergistic effect at combination DOX-EEH, 100nM/ml-10μg/ml; 260nM/ml-10μg/ml: 200nM/ml-10μg/ml; 100nM/ml-30μg/ml. EEH induced apoptosis and decreased COX-2 expression, EEH had weak inhibition in G1 phase, while doxorubicin had strong inhibition in G2/M phase of Widr cell cycle arrested. These results showed that response of EEH-doxorubicin combination treatment on WiDr possessed synergistic effect and induced apoptosis by decreassing COX-2 expression with inhibition in G2/M phase of cell cycle arrested.

Kata Kunci : Hedyotis corymbosa,Kombinasi,Sel WiDr,Sitotoksik, combination, H. corymbosa, WiDr cell line, doxorubicin, cytotoxic