Efek ekstrak etanolik hedyotis corymbosa l. terhadap aktifitas sitotoksin doxorubicin pada sel MCF-7

HARYANTI, Sari, Edy Meiyanto, Dr., M.Si., Apt

2008 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Doxorubicin merupakan agen kemoterapi utama dalam pengobatan kanker payudara. Doxorubicin menunjukkan aktivitas yang rendah terhadap sel kanker payudara MCF-7. Kombinasi dengan agen kemopreventif diharapkan dapat meningkatkan aktivitas doxorubicin. Herba rumput mutiara (Hedyotis corymbosa L) dengan kandungan utama asam ursolat berpotensi dikembangkan sebagai agen kemopreventif. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek perlakuan kombinasi doxorubicin dengan ekstrak etanolik rumput mutiara terhadap sel kanker MCF-7. Ekstraksi dilakukan dengan maserasi menggunakan penyari etanol 96% selama 3x24 jam, kemudian dikeringkan dengan freeze drying hingga diperoleh ekstrak kering (ERM). Identifikasi asam ursolat dengan KLT: fase diam silika gel, fase gerak kloroform-aseton (9:1) dan penampak bercak asam sulfat 10% dalam etanol dan pengamatan dilakukan pada sinar tampak. Aktivitas sitotoksik perlakuan tunggal ERM dan doxorubicin maupun kombinasi keduanya menggunakan MTT assay untuk mendapatkan nilai IC50 dan CI (Combination Index). Efek induksi apoptosis dilakukan dengan pengecatan akridin oranyeetidium bromida. Pengamatan ekspresi protein Bcl-2 dengan metode imunositokimia. Profil siklus sel diamati dengan flow cytometry dan dianalisis dengan program Cell Quest. Profil KLT ERM memperlihatkan kemungkinan adanya asam ursolat pada Rf 0,6. Nilai IC50 perlakuan tunggal ERM, asam ursolat dan doxorubicin berturutturut sebesar 77 μg/mL, 10 μg/mL dan 349 nM (0,19 μg/mL). Kombinasi doxorubicin 200 nM - ERM 8, 20, 25 dan 40 μg/mL menunjukkan efek sinergis (CI 0,66-0,99). Kombinasi 200 nM doxorubicin-ERM 25 μg/mL mampu meningkatkan insidensi apoptosis dan menghambat ekspresi protein Bcl-2. Analisis siklus sel perlakuan tunggal doxorubicin 40 dan 200 nM memperlihatkan hambatan yang kuat pada fase G2/M; sedangkan ERM 25 μg/mL memperlihatkan hambatan yang lemah pada fase G1. Perlakuan tunggal ERM konsentrasi IC50 tidak menunjukkan adanya hambatan siklus sel. Perlakuan kombinasi 200 nM doxorubicin-ERM 25 μg/mL menunjukkan efek sinergis berupa peningkatan insidensi apoptosis di sub-G1 tanpa menunjukkan hambatan siklus sel. Rumput mutiara potensial untuk dikembangkan sebagai agen kemopreventif. Respon sel MCF-7 terhadap pemberian kombinasi doxorubicin dan ERM menunjukkan efek sinergis dengan meningkatkan terjadinya sel apoptosis melalui penurunan ekspresi Bcl-2 serta tidak menunjukkan penghambatan siklus sel.

Doxorubicin is a main chemoterapeutic agent for the treatment of breast cancer. Doxorubicin has low activity in MCF-7 breast cancer cell. Combination with chemopreventif agent is an alternatif to enhance its activity. Rumput mutiara (Hedyotis corymbosa L) is one of the plants that has been used for traditional medicine with ursolic acid as the main compound. The aim of this research is to examine the effect of rumput mutiara herb ethanolic extract (ERM) in combination with doxorubicin against MCF-7 cancer cell line. Hedyotis corymbosa L. herb powder extraction was done with maseration 3x24 hours using ethanol 96%. Identification of ursolic acid was done with TLC method with silica gel and developed in a mixture of chloroform:aceton (9:1); and observed in visible light after spraying with sulfuric acid 10% in ethanol. Growth inhibitory effect of doxorubicin and ERM alone or in combination treatment were done using MTT assay to obtain IC50 and CI (Combination Index). Apoptosis induction was done by acrydine orange-etidium bromide staining. The Bcl-2 protein expression was examined with imunocytochemistry assay. Cell cycle was done using flow cytometry method and then analyzed with cell quest programme. ERM had similar Rf with ursolic acid standard: 0,6. Single application of ERM, ursolic acid and doxorubicin inhibited cell growth against MCF-7 with IC50 77, 10 μg/mL and 349 nM (0,19 μg/mL). Combination of doxorubicin 200 nM with ERM 8, 20, 25 and 40 μg/mL showed synergistic effect (CI 0.66-0.99). Combination of 200 nM doxorubicin-25 μg/mL ERM induced apoptosis and decreased Bcl-2 expression. This combination had similar effect on cell cycle analysis; the induction of apoptosis was more dominant than cell cycle arrested. Doxorubicin 40 and 200 nM alone had strong inhibition in G2/M phase, but ERM 25 μg/mL had a weak effect in G1 phase, and ERM IC50 was not induced cell cycle arrested. These results conclude that response of ERM-doxorubicin combination treatment on MCF-7 possess synergistic effect and induce apoptosis by decreased Bcl-2 expression without cell cycle arrested.

Kata Kunci : efek sinergis,hedyotis corymbosa L,MFC,7 doxorubicin,